抗体-转座酶融合蛋白及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114106196A(43)申请公布日2022.03.01(21)申请号202111275800.0C07K1/22(2006.01)(22)申请日2021.10.29C12Q1/6806(2018.01)C12N15/10(2006.01)(71)申请人陈凯C40B50/06(2006.01)地址650500云南省昆明市呈贡区时代俊园A4地块25栋2单元301申请人云南中科灵长类生物医学重点实验室(72)发明人陈凯张全勇宋宁(74)专利代理机构湖南兆弘专利事务所(普通合伙)43008代理人陈晖(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N9/12(2006.01)C12N15/70(2006.01)权利要求书1页说明书12页序列表6页附图3页(54)发明名称抗体-转座酶融合蛋白及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种抗体‑转座酶融合蛋白及其制备方法和应用，抗体‑转座酶融合蛋白包括His蛋白、TEV蛋白、抗体蛋白和Tn5蛋白，His蛋白依次与TEV蛋白、抗体蛋白和Tn5蛋白通过linker蛋白进行融合连接。制备方法：将目的基因插入到载体质粒的克隆位点获得可用于蛋白表达的重组质粒；将重组质粒转化至感受态细胞中进行诱导表达。本发明中的抗体‑转座酶融合蛋白，在原位对靶蛋白进行识别，将Tn5锚定在靶蛋白处，同时与Tn5连接的adaptor上加有特定的barcode序列，实现与抗体的对应，从而同时标记多个靶蛋白，并可以彼此区分，可用于制备单细胞多蛋白位点的分析试剂盒。CN114106196ACN114106196A权利要求书1/1页1.一种抗体‑转座酶融合蛋白，其特征在于，所述抗体‑转座酶融合蛋白包括His蛋白、TEV蛋白、抗体蛋白和Tn5蛋白，所述His蛋白依次与TEV蛋白、抗体蛋白、Tn5蛋白通过linker蛋白进行融合连接。2.根据权利要求1所述的抗体‑转座酶融合蛋白，其特征在于，所述抗体‑转座酶融合蛋白为His‑TEV‑antirabbitIgG‑Tn5和His‑TEV‑antimouseIgG‑Tn5中的一种或多种；所述His‑TEV‑antirabbitIgG‑Tn5的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；所述His‑TEV‑antimouseIgG‑Tn5的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。3.一种权利要求1或2所述抗体‑转座酶融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将目的基因插入到载体质粒的克隆位点获得可用于蛋白表达的重组质粒；S2、将所述重组质粒转化至感受态细胞中，进行诱导表达得到抗体‑转座酶融合蛋白。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：S3、将所述抗体‑转座酶融合蛋白用镍柱特异性结合组氨酸标签进行分离纯化。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述S1具体为：S1‑1、根据重链抗体序列的起始密码子和终止密码子设计引物对A1和A2，进行PCR扩增获得目的片段；S1‑2、从目的片段插入位点的两侧设计引物对B1和B2，进行PCR扩增获得载体片段；S1‑3、将目的片段和载体片段进行混合，孵育得到可用于蛋白表达的重组质粒。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述A1的DNA序列如SEQIDNO.3所示；所述A2的DNA序列如SEQIDNO.4所示；所述B1的DNA序列如SEQIDNO.5所示；所述B2的DNA序列如SEQIDNO.6所示。7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述S2具体为：S2‑1、将重组质粒转化至感受态细胞中获得转化菌落；S2‑1、挑取单克隆进行扩大培养；S2‑3、加入IPTG诱导表达获得抗体‑转座酶融合蛋白。8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述S3具体为：S3‑1、采用高压破碎法将大肠杆菌裂解，将裂解液过滤取上清液；S3‑2、将镍珠加入到上清液中，孵育，用Washbuffer进行洗杂，用Elutionbuffer进行洗脱，获得纯化的蛋白。9.一种权利要求1或2所述抗体‑转座酶融合蛋白在制备单细胞的多蛋白位点的ChIP‑seq分析的检测试剂盒中的应用。2CN114106196A说明书1/12页抗体‑转座酶融合蛋白及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种抗体‑转座酶融合蛋白及其制备方法和应用。背景技术[0002]染色质免疫沉淀(Chromatinimmunoprecipitation,ChIP)和染色质免疫沉淀结合高通量测序(Chromatinimmunoprecipitationfollowedbysequencing,ChIP‑seq)是广泛使用的、经典的研究蛋白质‑DNA互作