信号调节蛋白α片段-抗FcRn单链抗体融合蛋白及其制备与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111484558A(43)申请公布日2020.08.04(21)申请号201910082014.5(22)申请日2019.01.28(71)申请人上海交通大学地址200240上海市闵行区东川路800号(72)发明人徐宇虹吴凤岚邱阳生(74)专利代理机构上海光华专利事务所(普通合伙)31219代理人许亦琳余明伟(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/63(2006.01)A61K38/17(2006.01)A61K47/68(2017.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书18页序列表8页附图8页(54)发明名称信号调节蛋白α片段-抗FcRn单链抗体融合蛋白及其制备与应用(57)摘要本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种信号调节蛋白α片段-抗FcRn单链抗体融合蛋白及其制备与应用。本发明所述融合蛋白为含有信号调节蛋白α片段和抗FcRn单链抗体的融合蛋白，所述信号调节蛋白α片段通过连接肽与所述抗FcRn单链抗体连接。本发明所述的融合蛋白很好的保留了与hFcRn结合特异性和pH依赖性，半衰期长，可以作为融合蛋白载体用于长效大分子药物开发研究，在长效多肽和蛋白药物的开发上具有广阔的应用前景和巨大的经济、社会价值，同时SIRPα-F8与靶向肿瘤细胞的单克隆抗体联用可以治疗肿瘤。CN111484558ACN111484558A权利要求书1/1页1.一种融合蛋白，为含有信号调节蛋白α片段和抗FcRn单链抗体的融合蛋白，所述信号调节蛋白α片段通过连接肽与所述抗FcRn单链抗体。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白中，所述信号调节蛋白α片段是指信号调节蛋白α的胞外IgV样结构域，氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；抗FcRn单链抗体的氨基酸序列如SEQIDNO：3所示。3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白中，所述连接肽的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示。4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示。5.一种多核苷酸，其编码权利要求1-4任一权利要求所述融合蛋白。6.一种表达载体，其含有权利要求5所述多核苷酸。7.一种宿主细胞，其被权要求6所述载体转化。8.一种如权利要求1-7任一权利要求所述融合蛋白的制备方法，包括下列步骤：1)获得编码融合蛋白的融合基因序列；2)将获得的融合基因序列插入到合适的表达载体中，得到相应的核酸构建体；3)将获得的核酸构建体转染适宜的宿主细胞；4)在适宜的培养条件下，培养步骤3)的转染细胞，并从中分离纯化所表达的融合蛋白。9.如权利要求1-4任一权利要求所述融合蛋白用于延长大分子药物半衰期或用于制备抗肿瘤药物的用途。10.一种药物，包括如权利要求1-4任一权利要求所述融合蛋白或包括具有所述融合蛋白结构的大分子，及至少一种药学可接受的载体或赋形剂。2CN111484558A说明书1/18页信号调节蛋白α片段-抗FcRn单链抗体融合蛋白及其制备与应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种信号调节蛋白α片段-抗FcRn单链抗体融合蛋白及其制备与应用。背景技术[0002]信号调节蛋白α(SIRPα)是广泛表达在巨噬细胞和树突状细胞等髓系细胞表面的跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族分子。SIRPα胞外区包含了一个IgV和两个IgC免疫球蛋白样的结构域，其中这个具有多样性的IgV样结构域可以和其配体CD47有效结合。CD47广泛表达与组织细胞中，CD47通过和巨噬细胞表面的SIRPα结合，可以产生“别吃我”信号，组织巨噬细胞的吞噬作用。现有一些抗CD47抗体或SIRP-Ig融合蛋白，蛋白结构内都含有Fc片段。该Fc片段的作用主要有两点：一是可以延长蛋白分子的半衰期；二是可以募集巨噬细胞等来吞噬高表达CD47的肿瘤细胞。由于红细胞表面有大量CD47表达，因此，以上抗体或蛋白在抗肿瘤的同时会引起溶血等副作用。因此急需一种不含Fc结构的抗CD47蛋白药物来减少溶血等毒副作用，但是仍能保持蛋白分子的较长半衰期。[0003]FcRn是在血管内皮细胞和髓系细胞中高表达的一类Fc受体，它与维持血液中高浓度的IgG和白蛋白水平密切相关。脉管系统通过内吞作用清除血液中废物和异物的同时，也通过FcRn以pH依赖的结合方式维持IgG和白蛋白在血液中的高浓度。FcRn功能主要是介导IgG跨细胞屏障的转运和保护IgG和血清球蛋白(Serumalbumin,SA)避免在胞内的降解从而延长它们在生物体内的半衰期。其跨细胞转运和对IgG及SA的保护机制主要在于FcRn与IgG抗体和SA结