一种基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型及其构建方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114982718A(43)申请公布日2022.09.02(21)申请号202210756658.X(22)申请日2022.06.30(71)申请人滨州医学院地址264003山东省烟台市莱山区观海路346号(72)发明人田梗徐玉雪杨春华姚翠芳吴晓俊倪飞雪孙大系杨阳闫淼朱艳萍(74)专利代理机构西安正华恒远知识产权代理事务所(普通合伙)61271专利代理师陈选中(51)Int.Cl.A01K67/027(2006.01)C12N15/85(2006.01)C12N15/60(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图4页(54)发明名称一种基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型及其构建方法(57)摘要本发明提供了一种基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型及其构建方法，以解决目前用于科学研究的基因敲除型肥胖动物模型非常有限，且市场没有具有稳定遗传性的基因敲除型肥胖模型小鼠，都是需要后天培养改造的，建模时间较长，造模成功率低，死亡率高的问题。因此，发明一种肥胖型小鼠模型及其构建方法，来实现造模稳定，成功率高，能稳定遗传的肥胖型小鼠来解决上述问题很有必要。CN114982718ACN114982718A权利要求书1/1页1.一种基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型，其特征在于，为特异性敲除胰岛β细胞AC3基因的小鼠。2.根据权利要求1所述的基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型，其特征在于，所述AC3基因包含位于AC3外显子两侧的两个LOXP位点。3.一种如权利要求1或2任意一项所述的基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：将包含同源臂以及AC3基因第3至第5外显子的片段通过PCR‑BAC载体进行克隆并扩增，插入LOXP位点和包含有SDAsite的neo盒，并顺序组装成靶向载体、重组位点和选择标记，得到条件靶向载体，将所述条件靶向载体转染到小鼠胚胎干细胞内，得到转染细胞；验证所述转染细胞内的目的基因后构建flox小鼠模型，利用Cre‑LOXP杂交技术将所述flox小鼠模型与胰岛β细胞特异性启动子Ins2‑cre小鼠杂交，即得到所述基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型。2CN114982718A说明书1/5页一种基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型及其构建方法技术领域[0001]本发明属于生物工程技术领域，具体公开了一种基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型及其构建方法。背景技术[0002]近几十年来，肥胖在全球范围内的患病率明显升高。肥胖不仅被认为是一种独立的慢性代谢性疾病，同时已经成为全球性的公共卫生健康问题之一。肥胖个体患多种疾病的风险更高，包括2型糖尿病、心血管疾病、高血压、代谢综合征、某些癌症和睡眠呼吸障碍。此外，肥胖降低了寿命和一般生活质量。肥胖者体内存在着慢性低度的炎症，炎症因子的表达与皮下脂肪(SAT)及内脏脂肪(VAT)组织中组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的表达关系密切，进而引起一系列代谢紊乱以及与炎症有关的伴行疾病。尽管工业化国家在抗肥胖治疗方面已经投入了大量努力，但肥胖比例仍在持续增加。[0003]目前，用于科学研究的基因敲除型肥胖动物模型非常有限，且市场没有具有稳定遗传性的基因敲除型肥胖模型小鼠，都是需要后天培养改造的，建模时间较长，造模成功率低，死亡率高。发明内容[0004]本发明的第一目的在于提供一种基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型，其能够解决现目前基因敲除型肥胖模型小鼠建模时间较长、造模成功率低以及死亡率高的技术问题。[0005]本发明的第二目的在于提供一种基因缺陷导致的小鼠全身性肥胖模型的构建方法，该构建方法操作简单，不仅能够降低操作人员的操作难度，还能够节省建模时间，从而提升建模效率。[0006]与现有技术相比，本发明至少具有如下的优点与积极效果：[0007]本发明提供了一种基因敲除型肥胖小鼠模型及其构建方法，以解决目前用于科学研究的基因敲除型肥胖动物模型非常有限，且市场没有具有稳定遗传性的基因敲除型肥胖模型小鼠，都是需要后天培养改造的，建模时间较长，造模成功率低，死亡率高的问题。因此，发明一种肥胖型小鼠模型及其构建方法，来实现造模稳定，成功率高，能稳定遗传的肥胖型小鼠来解决上述问题很有必要。附图说明[0008]为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。[0009]图1为本发明实施例中胰岛β细胞特异性敲除AC3基因小鼠构建技术示意图；3CN114982718A说明书2/5页[0010]图2为本发明实施例中胰岛β细胞特异性敲除AC3小鼠