一种视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型的构建方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115843750A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202310012467.7(22)申请日2023.01.05(71)申请人南通大学附属医院地址226000江苏省南通市西寺路20号(72)发明人朱慧薛成斌徐茜郭益冰戚菁李晓红陆晶晶申娴娟(74)专利代理机构西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙)61223专利代理师庄华红(51)Int.Cl.A01K67/027(2006.01)A61K49/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图3页(54)发明名称一种视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型的构建方法(57)摘要本发明属于生物医药领域，具体涉及一种视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型的构建方法。该视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型的构建是通过在少突胶质细胞中特异性敲除Ezh2基因后获得视神经髓鞘形成缺陷小鼠。由该视神经髓鞘形成缺陷小鼠进一步构建视神经夹伤模型，该视神经夹伤模型能够用于筛选促进神经元内在生长力的药物，并用于视神经损伤后髓鞘再生、视神经髓鞘形成及治疗视神经脱髓鞘疾病的相关药物的研究。CN115843750ACN115843750A权利要求书1/1页1.一种视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型的构建方法，其特征在于，是通过在少突胶质细胞中特异性敲除Ezh2基因后获得视神经髓鞘形成缺陷小鼠。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法具体包括以下步骤：1)获得在Ezh2基因14、15号外显子两端插入floxp位点的Ezh2fl/fl小鼠；2)获得内源性Olig1启动子控制Cre重组酶表达的Olig1‑Cre小鼠；3)将Ezh2fl/fl小鼠和Olig1‑Cre小鼠杂交，获得Ezh2fl/+；Olig1‑Cre特异性敲除Ezh2小鼠杂合一代；4)将Ezh2fl/+；Olig1‑Cre特异性敲除Ezh2小鼠杂合一代与Ezh2fl/fl小鼠回交，获得Ezh2fl/fl；Olig1‑Cre纯合的特异性敲除Ezh2小鼠。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括：收获出生8～10周的Ezh2fl/fl；Olig1‑Cre纯合的特异性敲除Ezh2小鼠。4.一种视神经轴突损伤再生模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：按照权利要求1～3任一项所述的方法构建视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型；向视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型的玻璃体中注射提高神经元内在生长力的物质，再将小鼠模型在视盘后1毫米处压伤1～2秒，获得视神经轴突损伤再生模型。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，提高神经元内在生长力的物质为神经睫状因子CNTF、胰岛素样生长因子IGF1或骨桥蛋白OPN的AAV病毒中的一种或几种。6.一种根据权利要求1～3任一项所述的方法构建得到的视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型的用途，其特征在于，所述用途包括以下任一项：1)在促进视神经髓鞘形成药物研究中的用途；2)在促进视神经髓鞘再生药物研究中的用途；3)在治疗视神经脱髓鞘疾病药物研究中的用途；4)在促进神经元内在生长力药物研究中的用途。7.一种根据权利要求5所述的方法构建得到的视神经轴突损伤再生模型的用途，其特征在于，所述用途包括以下任一项：1)在促进视神经髓鞘形成的药物研究中的用途；2)在促进视神经髓鞘再生的药物研究中的用途；3)在治疗视神经脱髓鞘疾病的药物研究中的用途；4)在促进神经元内在生长力的药物研究中的用途。2CN115843750A说明书1/4页一种视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型的构建方法技术领域[0001]本发明属于生物医药领域，具体涉及一种视神经髓鞘形成缺陷小鼠模型的构建方法。背景技术[0002]哺乳动物中枢神经系统(CNS)的轴突再生是生物医学研究领域一个长期存在且极具挑战性的问题。视神经作为CNS的重要组成部分，一直是CNS损伤修复的重要研究对象。青光眼是由视网膜神经节细胞(retinalganglioncells，RGCs)轴突损伤引起的最常见的视神经病变，也是全球不可逆失明的主要原因。小鼠的视神经损伤症状类似于人类的青光眼，是除白内障之外的第二大致盲原因。白内障通常可以通过手术移除，但青光眼则没有有效的治疗方法。在青光眼中，轴突在视神经乳头处受损；在其他视神经病变中，轴突会沿着整个视觉通路受损。青光眼由视神经受压过高引起，全世界有将近7千万人深受此疾病之苦。外伤、视网膜脱落、垂体瘤、多种脑癌以及其它原因也会对视神经造成损伤，导致视力下降。由于人和哺乳动物CNS轴突无法再生，一旦轴突丢失，视力丧失不可逆转。创伤性视神经病变相对少见，通常发生在头部受伤后，病情严重并且不可逆，类似于视神经夹伤模型。成熟哺乳动物CNS中的神经元损伤后不能再生轴突，主要有两个原因：①疤痕组织的抑制和髓鞘退化所造成的