三聚氰胺定量检测试剂和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102507927A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102507927A(43)申请公布日2012.06.20(21)申请号201110311538.0(22)申请日2011.10.14(71)申请人沈鹤柏地址200234上海市徐汇区桂林路100号14号楼202室(72)发明人沈鹤柏宋旭(74)专利代理机构上海泰能知识产权代理事务所31233代理人宋缨孙健(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)G01N33/531(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书55页页附图附图11页(54)发明名称三聚氰胺定量检测试剂和方法(57)摘要本发明涉及一种三聚氰胺简便、快速、定量检测试剂及其检测方法。该试纸在检测区的近样品端提供一个三聚氰胺(MEL)抗体-胶体金区域，在检测区的另一端包被有三聚氰胺抗原检测线，通过该检测线中的三聚氰胺抗原与样品中存在的三聚氰胺竞争性结合所述MEL抗体的量，测定样品中的三聚氰胺含量。对原料奶的检测范围为0.12mg/L-12mg/L；对牛奶的检测范围为0.25mg/L-4mg/L，并且具备简便、快速、精密度高、稳定性好，检测费用低等优点，适用于对乳品中三聚氰胺的定量。CN102579ACN102507927A权利要求书1/1页1.一种三聚氰胺定量检测试纸，该试纸在检测区的近样品端提供一个MEL抗体-胶体金区域，在检测区的另一端包被有三聚氰胺抗原检测线，通过该检测线中的三聚氰胺抗原与样品中存在的三聚氰胺竞争性结合所述MEL抗体的量，测定样品中的三聚氰胺含量。2.根据权利要求1所述的三聚氰胺定量检测试纸，其特征在于，在所述检测区内还具有至少一条质控线。3.根据权利要求1所述的三聚氰胺定量检测试纸，其特征在于，所述的检测试纸对原料奶的检测范围为0.12mg/L-12mg/L。4.根据权利要求1所述的三聚氰胺定量检测试纸，其特征在于，所述的待测牛奶样品无需稀释或预处理。5.根据权利要求1所述的三聚氰胺定量检测试纸，其特征在于，所述的试纸还包括一样品垫，所述样品垫为经0.1-10％BSA，0.05-3％TritonX-100的0.01-0.1mol/LPBSpH＝5-10处理液浸泡处理的玻璃纤维膜。6.一种三聚氰胺定量检测试纸的制备方法，包括如下步骤：将20-200mL0.001-0.1％的HAuCl4溶液加热至沸，在剧烈搅拌下迅速加入0.5-5mL1％的柠檬酸钠溶液，保持沸腾状态反应5-30min后关闭热源即得胶体金溶液，调节pH至5-10，混合MEL单克隆抗体与胶体金溶液，涡旋反应10-30分钟，加入10％BSA封闭，重悬并浓缩，得到稳定的金标抗体。7.根据权利要求6所述的三聚氰胺定量检测试纸的制备方法，其特征在于，所述的pH值调节为7-9。8.一种三聚氰胺定量检测方法，依次包括如下步骤：(1)将液体样品滴于权利要求1所述的检测试纸的样品垫一侧，通过待测抗原与检测线中的三聚氰胺抗原竞争性结合MEL抗体使胶体金聚集而显色；(2)利用金标定量检测仪测量读取检测线的光密度来获得被检样品中三聚氰胺的浓度。9.根据权利要求8所述的定量检测方法，其特征在于，所述试纸对原料奶的检测范围为0.12mg/L-12mg/L；对牛奶的检测范围为0.25mg/L-4mg/L。10.根据权利要求8所述的定量检测方法，其特征在于，所述试纸上还具有至少一条质控线，利用金标定量检测仪测量读取检测线和质控线的光密度，制作标准工作曲线，获得被检样品中所述标志物的浓度。2CN102507927A说明书1/5页三聚氰胺定量检测试剂和方法技术领域[0001]本发明属三聚氰胺定量检测领域，特别是涉及利用胶体金免疫层析法和金标定量检测仪结合进行乳品的三聚氰胺定量检测。背景技术[0002]三聚氰胺(melamine)，分子式为：C3N6H6，俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1，3，5-三嗪-2，4，6-三氨基”，分子量为126.12，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，中国国家食品质量监督检测中心在2008年9月13日指出，三聚氰胺属于化工原料，不允许添加到食品中。三聚氰胺具有一定的肾毒性，食用后会导致人体泌尿系统产生结石。其分子中含有大量氮元素，用全氮法检测蛋白质含量时不能够区分这种“伪蛋白氮”，因此一些不法商家往乳制品中添加三聚氰胺粉以提高蛋白质含量，这对广大消费者特别是婴幼儿造成了严重的危害，对我国的乳业产生了较大的负面影响。如何解决“乳品安全”问题，建立原料乳的快速检测技术是关键之一。[0003]目前，用于奶粉、原料奶及牛奶中定量检测三聚氰胺含量的方法主要有HPLC法、HPLC-MS/MS法、GCMS法、ELISA法等，但这些方法耗时费力、成本高、对检测人员的专业性