从原料乳中分离β-乳球蛋白的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102746395A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102746395A(43)申请公布日2012.10.24(21)申请号201210231797.7C07K1/20(2006.01)(22)申请日2012.07.04(71)申请人浙江大学地址310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号(72)发明人刘建新任大喜缪淑颖(74)专利代理机构杭州中成专利事务所有限公司33212代理人金祺(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/30(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书55页页附图附图11页(54)发明名称从原料乳中分离β-乳球蛋白的方法(57)摘要本发明公开了一种从原料乳中分离β-乳球蛋白的方法，以新鲜牛乳为处理对象，经离心脱脂后形成脱脂乳；加入酸调节pH，静置一定时间后离心除去酪蛋白；调节溶液pH至酸性，并加入盐后静置一定时间，离心收集上清液；上清液调节pH，加入钠盐，静置后离心收集沉淀；沉淀冲洗后溶于PBS缓冲液；溶液经超滤除去盐分，冻干；采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别β-乳球蛋白，以反向色谱定量纯度。采用本发明的方法能从新鲜牛乳中，通过酸沉淀和盐析的方法分离出β-乳球蛋白，结合超滤除盐，能得到高纯度的β-乳球蛋白。本方法提高了β-乳球蛋白分离效率，为β-乳球蛋白其他方面研究及应用提供了优质的原材料。CN102746395ACN102746395A权利要求书1/1页1.从原料乳中分离β-乳球蛋白的方法，其特征是包括如下步骤：1）、将新鲜牛乳于3~5℃经离心和脱脂纱布过滤处理，从而除去乳脂肪，得首次滤液；2）、首次滤液调节pH至4.5~4.7，室温下静置20~40min；得处理后首次滤液；3）、将处理后首次滤液于3~5℃经离心和脱脂纱布过滤处理，所得的滤液重复上述3~5℃下的离心和脱脂纱布过滤处理，得二次滤液；4）、二次滤液调节pH至1.9~2.1，得处理后二次滤液；5）、先按照每1L处理后二次滤液添加65~75g氯化钠的用量比在二次滤液中加入氯化钠；然后再调节pH至1.9~2.1，接着室温下静置15~25min；6）、将步骤5）所得物于3~5℃下经离心和脱脂纱布过滤处理，收集滤液；7）、先按照每1L滤液添加220~240g氯化钠的用量比在滤液中加入氯化钠；然后再调节pH至1.9~2.1，接着室温下静置15~25min；8）、将步骤7）的所得物于室温下离心，将所得的沉淀溶解于PBS缓冲液或蒸馏水中；9）、室温下，将步骤8）所得的溶液用截留分子量10000的滤膜进行超滤2~8小时；所得的截留液经冻干，得冻干β-乳球蛋白粉末。2.根据权利要求1所述的从原料乳中分离β-乳球蛋白的方法，其特征是：将冻干β-乳球蛋白粉末进行提纯：用C8反相键合硅胶色谱柱、以乙睛-水为流动相进行梯度洗脱；分别得A型β-乳球蛋白和B型β-乳球蛋白。3.根据权利要求1或2所述的从原料乳中分离β-乳球蛋白的方法，其特征是：所述步骤1）为：将新鲜牛乳以3500~4500g，3~5℃，离心25~35min，4层脱脂纱布过滤；所述步骤3）为：将处理后首次滤液于3~5℃，4500~5500g下离心15~25min，4层脱脂纱布过滤；所述步骤6）为：将步骤5）所得物于3~5℃，8000~12000g下离心15~25min，4层脱脂纱布过滤；所述步骤8）为：将步骤7）的所得物于室温下9000~11000g离心15~25min。4.根据权利要求3所述的从原料乳中分离β-乳球蛋白的方法，其特征是：所述步骤2）、步骤4）中均用0.8~1.2M的盐酸调节pH值；步骤5）和步骤7）均用1.8~2.2M的盐酸调节pH值。5.根据权利要求4所述的从原料乳中分离β-乳球蛋白的方法，其特征是：所述步骤9）中的冻干为：于-40℃~-50℃下将截留液冻干至恒重。2CN102746395A说明书1/5页从原料乳中分离β-乳球蛋白的方法技术领域[0001]本发明涉及的是一种β-乳球蛋白的分离纯化方法，具体地说是一种从新鲜牛乳中高效分离和纯化β-乳球蛋白的方法。背景技术[0002]β-乳球蛋白存在于大多数哺乳动物的乳中，是由乳腺上皮细胞合成的乳特有蛋白，在牛乳中浓度约为3.2g/L，主要以二聚体的形式存在，2个单体由非共价键连接。当pH＜3.0或pH＞7.0时，β-乳球蛋白二聚体解离成单体。单体β-乳球蛋白分子量在18300道尔顿左右，等电点为5.1～5.3。β-乳球蛋白占乳清蛋白的55%左右，是乳清中的主要蛋白，是乳清蛋白的功能体现者。它具有改变牛乳热稳定性、与脂肪酸及风味物质结合、抗癌等生物学活性以及良好的搅打起泡性