一种检测过敏原牛奶的试剂盒和引物.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103103265103103265B(45)授权公告日2014.07.30(21)申请号201310016675.0许庆金等.牛奶过敏原PCR检测方法的建立.《食品工业科技》.2012,第33卷(第6期),(22)申请日2013.01.16第104-107页.(73)专利权人北京出入境检验检疫局检验检疫审查员徐荣技术中心地址100026北京市朝阳区甜水园街6号(72)发明人曾静程晋霞张蕾(74)专利代理机构北京正理专利代理有限公司11257代理人赵晓丹(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)(56)对比文件CN101368201A,2009.02.18,权利要求1-4.CN101368201A,2009.02.18,权利要求1-4.CN102367472A,2012.03.07,全文.许庆金等.牛奶过敏原PCR检测方法的建立.《食品工业科技》.2012,第33卷(第6期),权利要求书2页权利要求书2页说明书6页说明书6页第104-107页.序列表3页序列表3页附图2页附图2页(54)发明名称一种检测过敏原牛奶的试剂盒和引物(57)摘要本发明公开了一种检测过敏原牛奶的试剂盒和引物，具体涉及一组检测过敏原牛奶的引物，其具有序列表SEQIDNo.1至SEQIDNo.5所示的寡核苷酸序列，及含有这些引物的试剂盒及其检测方法，本发明所述的试剂盒灵敏度高、特异性强、成本低、操作简便。CN103103265BCN103265BCN103103265B权利要求书1/2页1.一组检测过敏原牛奶的引物，其特征在于，由序列表SEQIDNo.1至序列表SEQIDNo.5所示碱基序列的寡核苷酸组成；其中SEQIDNo.1为外侧上游引物，SEQIDNo.2为外侧下游引物，SEQIDNo.3为内侧上游引物，SEQIDNo.4为内侧下游引物，SEQIDNo.5为环状下游引物。2.一种检测过敏原牛奶的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以下试剂：（1）LAMP反应液，其包括：ThermoPol缓冲液、甜菜碱、dNTPs、MgSO4和检测引物；其中，所述检测引物为序列表SEQIDNo.1所示的外侧上游引物，序列表SEQIDNo.2所示的外侧下游引物，序列表SEQIDNo.3所示的内侧上游引物，序列表SEQIDNo.4所示的内侧下游引物，序列表SEQIDNo.5所示的环状下游引物；（2）BstDNA聚合酶；（3）DEPC水；（4）阴性对照；（5）阳性对照；（6）显色液：SYBRGreenI染料。3.一种检测过敏原牛奶的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1）提取样品的DNA；2）进行LAMP反应，该LAMP反应体系为：反应条件为63℃恒温反应60min，85℃2min使酶失活，反应结束；3）通过反应体系颜色变化和/或电泳检测进行结果判定；其中，进行LAMP反应时，使用的引物为序列表SEQIDNo.1所示的外侧上游引物，序列表SEQIDNo.2所示的外侧下游引物，序列表SEQIDNo.3所示的内侧上游引物，序列表2CN103103265B权利要求书2/2页SEQIDNo.4所示的内侧下游引物，序列表SEQIDNo.5所示的环状下游引物。3CN103103265B说明书1/6页一种检测过敏原牛奶的试剂盒和引物技术领域[0001]本发明涉及一种检测过敏原牛奶的试剂盒和引物，属生物技术领域。背景技术[0002]食物过敏已成为重要的食品安全问题。过敏性疾病发病率呈逐年上升趋势。据文献报道40%的小孩被诊断出在某种程度上患有过敏性疾病，1990～2000年在英国和爱尔兰已有8人死于此病。食物过敏目前只能预防，不可治愈。为了维护易过敏消费者的利益，美国和欧盟制定了食品致敏原标签法规，法规要求生产企业明确标明其产品中是否含有8大类和12种主要的食品致敏原，乳及乳制品是FAO/WHO认定的导致人类食物过敏的八大类食品之一,作为婴儿和儿童的主要食品及成人餐饮主要构成部分的牛奶与奶制品的质量和安全备受关注。由于婴儿和儿童的耐受力有限，过敏一旦发生结果往往比较严重。甚至会导致儿童过敏性死亡,调查发现牛奶及其制品引发的儿童过敏发生率高达7.5％，因此牛奶也是美国及欧盟新食品标签法中规定必须标示的过敏原成分之一，而中国食品出口企业常因食品过敏原标注不正确而被美国FDA通报且遭遇退货。国内的过敏原研究尚处在起步阶段。本研究尝试在国内研制出高灵敏、高特异的牛奶过敏原成分lamp检测试剂盒．以满足我国进出口食品贸易的需求．同时为制定我国食品过敏原标签管理奠定了技术基础[0003]目前普遍应用基于DNA的检测技术对过敏原牛奶进行检测。用于检测牛乳过敏原的