一种检测蚜虫蓝光趋光性的方法及引物和试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107091933A(43)申请公布日2017.08.25(21)申请号201710415726.5(22)申请日2017.06.02(71)申请人湖北工程学院地址432000湖北省孝感市交通大道272号(72)发明人李春生王永张兴甫(74)专利代理机构北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371代理人吴啸寰(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表7页附图2页(54)发明名称一种检测蚜虫蓝光趋光性的方法及引物和试剂盒(57)摘要本发明公开了一种检测蚜虫蓝光趋光性的方法及引物和试剂盒，涉及农业生物技术领域。本发明公开的检测蚜虫蓝光趋光性的方法，其包括比对所述目标蚜虫的CRY1蛋白与豌豆蚜的CRY1蛋白的氨基酸序列；根据序列比对结果，判断所述目标蚜虫的蓝光趋光性。该检测方法时间短，准确性高，避免了传统测定趋光性方法所存在的工作量大、用时较长、易受环境因素影响等缺陷，是一项重大技术革新，效率显著提高，为蚜虫预警和绿色防控提供关键技术支撑，在蚜虫防治领域具有十分重要的应用价值，可应用于蚜虫防治、蚜虫虫情预测或蚜虫预警等领域。CN107091933ACN107091933A权利要求书1/1页1.一种检测蚜虫蓝光趋光性的方法，其特征在于，其包括：序列比对，比对所述目标蚜虫的CRY1蛋白与豌豆蚜的CRY1蛋白的氨基酸序列；根据序列比对结果，判断所述目标蚜虫的蓝光趋光性。2.根据权利要求1所述的检测蚜虫蓝光趋光性的方法，其特征在于，若所述目标蚜虫的CRY1蛋白与所述豌豆蚜的CRY1蛋白的氨基酸序列之间的相似度低于或等于90％，则所述目标蚜虫缺失蓝光趋光性；若所述目标蚜虫的CRY1蛋白与所述豌豆蚜的CRY1蛋白的氨基酸序列之间的相似度高于90％，则所述目标蚜虫具有蓝光趋光性。3.根据权利要求1或2所述的检测蚜虫蓝光趋光性的方法，其特征在于，在序列比对之前，所述方法还包括：获取所述目标蚜虫的编码CRY1蛋白的CRY1基因序列。4.根据权利要求3所述的检测蚜虫蓝光趋光性的方法，其特征在于，所述方法包括：以所述目标蚜虫的cDNA为模板，用SeqIDNo.5-6所示的引物进行PCR扩增，对得到的目标片段进行测序，得到所述目标蚜虫的CRY1基因序列，其中，所述目标蚜虫为油菜蚜虫。5.根据权利要求4所述的检测蚜虫蓝光趋光性的方法，其特征在于，PCR扩增的退火温度为55℃。6.根据权利要求4所述的检测蚜虫蓝光趋光性的方法，其特征在于，所述方法包括：提取所述目标蚜虫的RNA，反转录后得到所述cDNA。7.根据权利要求1所述的检测蚜虫蓝光趋光性的方法，其特征在于，所述豌豆蚜的CRY1蛋白的氨基酸序列如SeqIDNo.9所示。8.权利要求1-7中任一项所述的检测蚜虫蓝光趋光性的方法在蚜虫防治、蚜虫虫情预测或蚜虫预警中的应用。9.一种用于检测蚜虫蓝光趋光性的引物，其特征在于，其包括用于扩增所述目标蚜虫的CRY1基因的引物对。10.一种用于检测蚜虫蓝光趋光性的试剂盒，其包括权利要求9所述的引物。2CN107091933A说明书1/10页一种检测蚜虫蓝光趋光性的方法及引物和试剂盒技术领域[0001]本发明涉及农业生物技术领域，具体而言，涉及一种检测蚜虫蓝光趋光性的方法及引物和试剂盒。背景技术[0002]蚜虫在农林生产中是危害严重的害虫之一，主要危害的农作物有棉花、小麦、蔬菜、油菜等。它的危害性可以让植物无法正常生长发育，如植物营养缺乏、生长畸形、产量下降，质量受损等。油菜上蚜虫的主要种类有桃蚜(Myzuspersicae)、萝卜蚜(Lipaphiserysimi)和甘蓝蚜(Brevicorynebrassicae)3种，以成蚜或若蚜刺吸养分，不仅危害油菜生长，而且传播多种病毒病，影响油菜的产量和品质，造成严重的经济损失。因此，油菜蚜虫的加剧，对整个油菜产业都会造成损失，特别是对经济效益的影响。[0003]目前化学农药一直是害虫防治中应用最广泛、最有效的手段之一。化学防治虽然见效快，使用方便，但是会造成害虫抗药性增加、环境污染、破坏生态系统等一系列问题。[0004]物理防治是绿色防控最直接的防治手段。可以利用害虫的趋光性达到诱杀的效果，如黄板诱杀、黑光灯、频振杀虫灯等。利用物理措施防治害虫，污染小且不产生抗性，极大地提高了“益害比”，符合绿色防控的基本要求。[0005]昆虫对颜色的趋性本质是趋光性。昆虫的趋光性是通过其视觉器官(复眼和单眼)中的感光细胞对光波产生感应而做出的趋向反应。何国兴(光谱视觉匹配方法的探讨.照明工程学报，2000，11(3)：20-23)根据色彩