山羊结核病PCR检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103509859103509859A(43)申请公布日2014.01.15(21)申请号201310346637.1(22)申请日2013.08.09(71)申请人贵州省畜牧兽医研究所地址550005贵州省贵阳市龙洞堡老李坡(72)发明人冉懋韬余波谭诗文王凡艾玉萍(74)专利代理机构贵阳中新专利商标事务所52100代理人李亮程新敏(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12Q1/04(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书4页说明书4页序列表1页序列表1页附图1页附图1页(54)发明名称山羊结核病PCR检测试剂盒(57)摘要本发明公开了一种山羊结核病PCR检测试剂盒，本发明的实施例：山羊结核病PCR检测试剂盒，它包括250μL的PCRpremix缓冲液，150μL超纯水，50μL的MarkerDL2000，40μL浓度为10µmol/L的上引物及40μL浓度为10µmol/L的下引物，20μL阴性对照以及20μL阳性对照。本发明根据牛结核分枝杆菌特异性基因片段设计引物，利用该引物建立了快速、敏感、特异的诊断山羊结核病的PCR检测方法。将其应用在PCR快速检测试剂盒中，可快速检测出山羊结核病，并且具有良好的特异性及敏感性。本发明检测结果准确，并且快捷、灵敏，操作简单，使用效果好。CN103509859ACN103598ACN103509859A权利要求书1/1页1.一种山羊结核病PCR检测试剂盒，其特征在于：它包括250μL的PCRpremix缓冲液，150μL超纯水，50μL的MarkerDL2000，40μL浓度为10µmol/L的上引物及40μL浓度为10µmol/L的下引物，20μL阴性对照以及20μL阳性对照；；上游引物的序列为：5’-ATCAGCGACTACCTGGCCGAAG-3’；下游引物的序列为：5’-GTGGCGTGCCGTTCTCGTCG-3’。2.根据权利要求1所述的山羊结核病PCR诊断试剂盒，其特征在于：阴性对照为超纯水。3.根据权利要求1所述的山羊结核病PCR诊断试剂盒，其特征在于：阳性对照为标准山羊结核杆菌的PCR产物。4.根据权利要求1所述的山羊结核病PCR检测试剂盒，其特征在于：PCRpremix缓冲液由3mmol/ul的MgCl2，500pmol/ul的dNTP2.0μL，25mmol/μL的Tris-HCl及0.2μLTaq酶组成，其PH值为pH8.3。2CN103509859A说明书1/4页山羊结核病PCR检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及一种试剂盒，尤其是一种山羊结核病PCR检测试剂盒。背景技术[0002]结核病(Tuberculosis)是由结核分支杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)引起人、畜、禽共患的一种慢性传染病。山羊结核病是由牛分枝杆菌(M.bovis)引起的一种人畜共患慢性传染病，该病被国际兽疫局(OIE)列为B类动物疾病，其传播和流行影响着畜牧业的持续发展和人类的健康。传统的牛结核分枝杆菌检测方法主要是细菌学检查，但由于繁琐费时、检出率低、灵敏度差，已不能满足当前疫病检疫的需要。分离培养需要周期长，一般需要1~2个月。而传统的结核菌素皮内变态反应(PPD)检测方法，不断有报道存在非特异性反应。发明内容[0003]本发明的目的是：提供一种山羊结核病PCR检测试剂盒，它可以快速检测山羊结核病，并且简便、灵敏、准确、特异性强。[0004]本发明是这样实现的：山羊结核病PCR检测试剂盒，它包括250μL的PCRpremix缓冲液，150μL超纯水，50μL的MarkerDL2000，40μL浓度为10µmol/L的上引物及40μL浓度为10µmol/L的下引物，20μL阴性对照以及20μL阳性对照；上游引物的序列为：5’-ATCAGCGACTACCTGGCCGAAG-3’；下游引物的序列为：5’-GTGGCGTGCCGTTCTCGTCG-3’。[0005]阴性对照为超纯水。[0006]阳性对照标准山羊结核杆菌的PCR产物。[0007]PCRpremix缓冲液由3mmol/ul的MgCl2，500pmol/ul的dNTP2.0μL，25mmol/μL的Tris-HCl及0.2μLTaq酶组成，其PH值为pH8.3。[0008]为了验证本发明的技术效果，进行了以下实验：山羊结核病PCR诊断方法的建立1、材料与方法1、1材料1、1、1病料病料来自贵州省贵阳市、遵义市、安顺市、六盘水市、铜仁地区、黔南、黔东南、瓮安县等几个规模化养羊场和养羊专业户的送检材料及采集的山羊血清（或全血）。[0009]1、1、2菌株牛分枝杆菌参考菌株[编号