PCR荧光检测试剂盒生产质控规程.doc

PCR荧光检测试剂盒生产质量控制规程一.微量加样器的使用规定1．微量加样器校正：:使用微量加样器吸10μl10次是否为100μl。2．加样前吸头润湿：当吸头排空时，仍会有一些残留的液体以薄膜的形式吸附在吸头里面，所以，在加样时先吸打液体数次，充分润湿吸头管腔,以保证加样的一致性。3．加样时吸头应靠试管壁：加样时吸头的液体顺着管壁流出，防止液滴的形成由于其表面张力的作用而阻止样本的释放。4．吸头是否与加样器上吸头套筒密封：样器上吸头与套筒密封完好。5．加样时注意第一停点和第二停点：吸液是应注意大拇指按下按钮至第一停点，缓慢慢慢吸入液体。停留1s，然后将吸头提离液面。用吸纸抹去吸嘴外面可能黏附的液滴。放液时经过第一停点，停1-2s后，继续按压到第二停点，排出残余液体。6．PCR反应原液由于有甘油在冷的状态较黏稠,易于1次吸取数人份，慢一些。7．边加边看,直观估计,防止跳管。8．低温冷藏批量DNA提取液、PCR反应液A和B取出时是否充分混匀后,分装使用，PCR反应液A和B是否避光低温冷藏和使用。9．配PCR反应液应先加缓冲液再加PCR反应液充分混匀,必要时倒置混匀,再离心,或用灭菌吸头上下吸几次。10．PCR反应液（包括样品）应充分混匀:保证PCR反应曲线呈S形，全阴性样品呈近似水平曲线。二．PCR试验操作规程程序操作检查操作1混匀方法每一次提醒注意倒置混匀、移液器吹打、震荡，50000rpm离心1分钟。2取血清样本1）因水分蒸发变浓2）冻状、混浊按（1）法混匀,再取25µl加水5µl混匀。温水浴37℃溶解按（1）法混匀,或12000rpm离心5分钟，取清液。3取质控品冻状、混浊温水浴37℃溶解按（1）法混匀或12000rpm离心5分钟，取清液。4血清样本稀释混匀血清阴性血清40µl加阳性血清10µl，按（1）法混匀。5倍稀释5质控品稀释混匀质控品血清稀释液40µl加质控品10µl，按（1）法混匀5倍稀释。6血清样本DNA提取DNA提取液完好血清样本按（1）法混匀，取30µl加DNA提取液60µl，按（1）法混匀，98℃8分钟变性,0℃冷却2-3分钟，12000rpm，离心10分钟,吸取上清液。7质控品DNA变性分装，有效，呈清液状态，未反复加热、冻融质控品按（1）法混匀，取30µl5000rpm离心1分钟，98℃5分钟变性,5000rpm，离心1分钟,吸取上清液。8PCR反应液混匀状态取25µl反应液加5µl提取DNA，按（1）法混匀，5000rpm离心1分钟，5000rpm，离心1分钟,吸取上清液。9PCR反应室温10-30℃PCR反应槽四角不放管。10设阴性对照阴性混匀血清CT〉3811阳性参考品各浓度呈梯度以PCRA反应液制作标准曲线，呈直线。12阴性质控品B各浓度呈梯度以PCRA和B反应液制作标准曲线，呈直线。**血清稀释液：全阴性血清再加2倍HBVDNA提取液混匀,5000rpm，离心1分钟，混匀血清98℃5分钟变性,12000rpm，离心10分钟,吸取上清液。三.超净工作台的使用、维护保养与清洁标准操作规程1.目的建立一个超净工作台的使用、维护保养与清洁标准操作程序，使操作过程标准化。2.职责质量部QC负责本文件的起草，质量部及QC检验人员负责本标准的实施。3.范围本标准适用于超净工作台的使用、维护和保养与清洁。4.内容4.1超净工作台的主要组成部分：高效过滤器、中效过滤器、通风机、电气控制及排气管道部分。4.2安放点的选择：4.2.1应安放于卫生条件较好的地方，便于清洁，门窗能够密封以避免外界的污染空气对室内的影响。4.2.2安放位置应远离有震动及噪音大的地方。4.2.3严禁安放在产生大尘粒及气流大的地方，以保证操作区空气的正常流动。4.3使用前的检查：4.3.1接通超净工作台的电源。4.3.2旋开风机开关，使风机开始正常运转，这时应检查高效过滤器出风面是否有风送出。4.3.3检查照明及紫外设备能否正常运行，如不能正常运行则通知工程部检修。4.3.4工作前必须对工作台周围环境及空气进行超净处理，认真进行清洁工作，并采用紫外线灭菌法进行灭菌处理。4.3.5净化工作区内严禁存放不必要的物品，以保持洁净气流流动不受干扰。4.4使用：4.4.1使用工作台时，先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。4.4.2接通电源，提前50分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累的微生物，30分钟后，关闭紫外灯，开启送风机。4.4.3工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。4.4.4操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。4.4.5最后开启工作台紫外灯，照射消毒30分钟后，关闭紫外灯，切断电源。4.4.6每二月用风速计测量一次工作区平均风速