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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105316429A(43)申请公布日2016.02.10(21)申请号201510666824.7(22)申请日2015.10.15(71)申请人北京科兴生物制品有限公司地址100085北京市海淀区上地西路39号北大生物城(72)发明人王洁如胡雅灵李晶宋俐霏张星星(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图5页(54)发明名称检测牛腺病毒的试剂盒及其应用(57)摘要本发明提供了检测牛腺病毒试剂盒及其应用,属于PCR检测技术领域。本发明首先通过对牛腺病毒基因组序列的比对,确定了在牛腺病毒各个血清型均保守的区域,并以该保守区为靶序列设计了用于检测牛腺病毒多有血清型的引物对和探针,其核苷酸序列分别如SEQIDNO.1,SEQIDNO.2,SEQIDNO.3所示,本发明还提供了对牛腺病毒进行实时荧光定量检测的方法和检测试剂盒。本发明的检测试剂盒具有检测准确,灵敏度高、特异性强,简便快速的优点,能够对各个血清型的牛腺病毒进行定量检测,且成本低廉,既可用于临床检测也可用于生物制品的质量控制,具有良好的经济价值和应用前景。CN105316429ACN105316429A权利要求书1/1页1.一种用于检测牛腺病毒的遗传标记物,其具有SEQIDNO.4所示的序列或其特异性片段。2.权利要求1所述的遗传标记物在制备检测各血清型牛腺病毒试剂盒中的应用。3.用于检测牛腺病毒的特异性引物对,其上下游引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2所示。4.与权利要求3所述特异性引物对配合使用的荧光探针,其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。5.权利要求3所述的特异性引物对和/或权利要求4所述的荧光探针在制备检测牛腺病毒试剂盒中的应用。6.含有权利要求3所述的特异性引物对的试剂盒。7.含有权利要求3所述的特异性引物对和权利要求4所述的荧光探针的试剂盒。8.如权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,该试剂盒基于实时荧光定量PCR方法,对待测样本提取基因组DNA后以其为模板,利用SEQIDNO.1、SEQIDNO.2所示的特异性引物对和SEQIDNO.3所示的荧光探针进行实时荧光定量PCR,检测待测样本中的牛腺病毒。9.权利要求6-8任一所述的试剂盒在生物制品质量检测中的应用。10.一种检测生物制品中牛腺病毒的方法,其特征在于,对待测生物制品样本提取基因组DNA后以其为模板,利用SEQIDNO.1、SEQIDNO.2所示的特异性引物对和SEQIDNO.3所示的荧光探针进行实时荧光定量PCR,检测待测生物制品样本中的牛腺病毒;或对待测生物制品样本提取基因组DNA后以其为模板,利用SEQIDNO.1、SEQIDNO.2所示的特异性引物对进行SYBRGreen荧光定量PCR,检测待测生物制品样本中的牛腺病毒。2CN105316429A说明书1/7页检测牛腺病毒的试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及PCR检测技术领域,特别是涉及用于检测各血清型牛腺病毒的靶序列、荧光定量PCR引物和探针,本发明还涉及利用该靶序列进行牛腺病毒检测的方法和试剂盒。背景技术[0002]牛腺病毒(Bovineadenovirus,BAV)属腺病毒科哺乳动物腺病毒属,为双链DNA病毒,可导致牛犊的呼吸道、消化道感染。BAV的感染较为普遍,许多国家从病牛及外表健康的犊牛的分泌物及粪便中分离发现,BAV不仅感染牛,还能使羊和鹿发病。BAV分为两个群,9个血清型,其中血清3型的感染较为普遍,研究最多。牛血清是生物制品行业不可缺少的原材料,外源因子的污染严重影响生物制品的质量,因此,对生物制品中牛病毒的检测非常重要,其中包括对牛腺病毒的检测。[0003]目前生物制品行业各生产厂家普遍采用细胞培养法,血吸附法,免疫荧光法进行检测,但这些方法存在敏感度低,检测周期长,检测精度低,结果判定易受多种因素影响,客观性不足,劳动量大等问题;常规PCR检测法虽然敏感性、稳定性、特异性较好,但容易污染,造成假阳性结果;已有的荧光定量PCR法虽然克服了上述方法的缺陷,但是仅能检测牛腺病毒3型,具有检测的局限性,并且仅能够进行牛腺病毒的定性检测,无法定量,检测特异性、灵敏度、检测范围等参数均未经验证。因此迫切需要一种能够同时检测各血清型的牛腺病毒的方法,以降低生物制品企业的生产成本,提高企业经济效益。发明内容[0004]本发明的目的在于提供用于检测各血清型牛腺病毒的特异、灵敏、快速、简便的方法以及检测试剂盒