一种牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105445473A(43)申请公布日2016.03.30(21)申请号201510781699.4(22)申请日2015.11.13(71)申请人中国检验检疫科学研究院地址100176北京市朝阳区惠新里241号楼611室(72)发明人韩雪清王慧煜梅琳牙侯勋(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/531(2006.01)权利要求书1页说明书11页序列表7页附图1页(54)发明名称一种牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒(57)摘要本发明提供了一种牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，属于蛋白质工程技术领域。本发明的试剂盒以牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP19、OMP22、OMP28混合抗原作为ELISA试剂盒的包被抗原，各抗原浓度分别为1μg/ml，按照体积比1:1:1进行混合得到混合抗原，血清稀释度为1:200，酶标二抗稀释度为1:20000，通过间接ELISA方法检测牛布鲁氏菌，本发明试剂盒具有特异性强，灵敏度高，准确率高，操作简便，重现性好的特点，具有良好的市场应用前景。CN105445473ACN105445473A权利要求书1/1页1.一种牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，其特征在于，以牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP19、OMP22、OMP28混合抗原作为ELISA酶标板的包被抗原。2.如权利要求1所述的牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述包被抗原是将浓度均为1μg/ml的OMP19、OMP22、OMP28三种蛋白按照体积比1:1:1混合得到。3.如权利要求1所述的牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，其特征在于，还含有马血清，牛布鲁氏菌阴性、阳性血清，酶标二抗，洗涤液，酶标抗体稀释液，底物显色液，终止液。4.如权利要求1-3任一所述的牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，其特征在于，牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP19通过以下方法制备得到：合成OMP19基因，序列如SEQIDNO.1所示；将OMP19基因与pCold-TF载体分别用BamHI和XhoI双酶切，将酶切后的OMP19基因与pCold-TF载体连接，转化大肠杆菌感受态细胞得到重组表达载体pCold-TF/OMP19；将重组表达载体pCold-TF/OMP19转化入感受态细胞，制得牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP19表达工程菌；经IPTG诱导表达；将表达产物过镍-NTA琼脂糖树脂层析柱，洗脱得到纯化的牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP19。5.如权利要求4所述的牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述OMP19基因是以布鲁氏菌DNA为模板，SEQIDNO.7-8所示的引物进行PCR扩增得到的。6.如权利要求1-3任一所述的牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，其特征在于，牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP22通过以下方法制备得到：合成OMP22基因，序列如SEQIDNO.2所示；将OMP22基因与pCold-TF载体分别用BamHI和XhoI双酶切，将酶切后的OMP22基因与pCold-TF载体连接，转化大肠杆菌感受态细胞得到重组表达载体pCold-TF/OMP22；将重组表达载体pCold-TF/OMP22转化入感受态细胞，制得牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP22表达工程菌；经IPTG诱导表达；将表达产物过镍-NTA琼脂糖树脂层析柱，洗脱得到纯化的牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP22。7.如权利要求6所述的牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述OMP22基因是以布鲁氏菌DNA为模板，SEQIDNO.9-10所示的引物进行PCR扩增得到的。8.如权利要求1-3任一所述的牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，其特征在于，牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP28通过以下方法制备得到：合成OMP28基因，序列如SEQIDNO.3所示；将OMP28基因与pCold-TF载体分别用BamHI和XhoI双酶切，将酶切后的OMP28基因与pCold-TF载体连接，转化大肠杆菌感受态细胞得到重组表达载体pCold-TF/OMP28；将重组表达载体pCold-TF/OMP28转化入感受态细胞，制得牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP28表达工程菌；经IPTG诱导表达；将表达产物过镍-NTA琼脂糖树脂层析柱，洗脱得到纯化的牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP28。9.如权利要求8所述的牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述OMP28基因是以布鲁氏菌DNA为模板，SEQIDNO.11-12所示的引物进行PCR扩增得到的。10.牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP19、OMP22、OMP28的混合抗原在制备检测牛布鲁氏菌试剂盒中的应用。2CN105445473A说明书1/11页一种牛布鲁氏菌ELISA检测试剂盒技