一种牛奶中乳果糖的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105784868A(43)申请公布日2016.07.20(21)申请号201610223749.1(22)申请日2016.04.12(71)申请人上海必诺检测技术服务有限公司地址200436上海市闸北区江场西路1577弄7-9号4楼(72)发明人杨晓敏王建军孟瑾郑小平何亚斌高勇兴(74)专利代理机构上海泰能知识产权代理事务所31233代理人黄志达魏峯(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图6页(54)发明名称一种牛奶中乳果糖的检测方法(57)摘要本发明涉及一种牛奶中乳果糖的检测方法，包括：将牛奶中的乳糖和乳果糖通过β-D-半乳糖苷酶反应水解成半乳糖、葡萄糖和果糖，再加入葡萄糖氧化酶将大部分葡萄糖氧化为葡萄糖酸，最后加入过氧化氢酶除去过氧化氢，得到测试液；采用具有安培检测器的离子色谱仪分析测试液，得到乳果糖的含量。本发明的方法能够准确、灵敏，操作简便地测定牛奶中乳果糖的含量。CN105784868ACN105784868A权利要求书1/1页1.一种牛奶中乳果糖的检测方法，包括：(1)取牛奶样品用水稀释后，依次加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液，静置，过滤，收集滤液；加入β-D-半乳糖苷酶，混匀后加盖，于50～60℃恒温培养1～2h；然后依次加入葡萄糖氧化酶、正辛醇、氢氧化钠溶液、过氧化氢和过氧化氢酶，于45～50℃恒温培养3～4h；冷却后定容，过滤，净化，收集滤液作为待测液；(2)采用具有安培检测器的离子色谱仪分析步骤(1)中的待测液，得到乳果糖的含量。2.根据权利要求1所述的一种牛奶中乳果糖的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的牛奶样品为鲜牛乳或牛奶的添加物。3.根据权利要求1所述的一种牛奶中乳果糖的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的亚铁氰化钾溶液的浓度为200g/L，与牛奶样品的体积比为1:5；硫酸锌溶液的浓度为200g/L，与牛奶样品的体积比为1:5。4.根据权利要求1所述的一种牛奶中乳果糖的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中加入硫酸锌溶液后加入缓冲液调整溶液pH值至7.5；加入β-D-半乳糖苷酶恒温培养后加入缓冲液调整溶液pH值至7.6。5.根据权利要求1所述的一种牛奶中乳果糖的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的β-D-半乳糖苷酶与滤液的体积比为0.1:5。6.根据权利要求1所述的一种牛奶中乳果糖的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的葡萄糖氧化酶、氢氧化钠溶液、过氧化氢、过氧化氢酶与滤液的体积比为0.1:0.5:0.05:0.1:5。7.根据权利要求1所述的一种牛奶中乳果糖的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的过滤采用0.45μm水相滤膜过滤；净化采用C18小柱净化。8.根据权利要求1所述的一种牛奶中乳果糖的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中的离子色谱仪分析的条件为：检测器：ED40电化学检测器，参比电极为Ag/AgCl、Au电极；色谱柱：CarboPacPA10色谱分离柱；流动相：超纯水；流速：1.0mL/min；淋洗液：10mmol/LKOH；进样体积：25μL。9.根据权利要求1所述的一种牛奶中乳果糖的检测方法，其特征在于：所述色谱柱的规格为：长度250mm×内径4mm。10.根据权利要求1所述的一种牛奶中乳果糖的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中的乳果糖的含量采用外标法定量。2CN105784868A说明书1/5页一种牛奶中乳果糖的检测方法技术领域[0001]本发明属于乳果糖检测领域，特别涉及一种牛奶中乳果糖的检测方法。背景技术[0002]乳果糖是乳糖在牛奶热处理过程中的异构化产物，是评估牛奶杀菌程度和贮藏时间的一项重要指标，国际奶制品组织(IDF)已建议乳果糖的浓度作为区别该奶产品是用巴氏法杀菌，超热处理和已灭菌的指示剂，因此牛奶中乳果糖的准确测定更显得格外重要。[0003]传统关于乳果糖的分析方法有色谱和酶分析这两种方法，但是由于牛奶中含有较多的乳糖，会影响乳果糖，使得这两种方法很难进行准确的定量分析。随着近年来离子色谱技术的不断成熟，运用离子色谱测定糖类成为了测定乳果糖的一种新的途径，但是乳糖和乳果糖的分离依然是一道难题，其对淋洗液浓度等条件的要求相当苛刻。发明内容[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种牛奶中乳果糖的检测方法，该方法能够准确、灵敏，操作简便地测定牛奶中乳果糖的含量。[0005]本发明的一种牛奶中乳果糖的检测方法，包括：[0006](1)取牛奶样品用水稀释后，依次加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液，静置，过滤，收集滤液；加入β-D-半乳糖苷酶(β-galactosidase)，混匀后加盖，于50～6