一种体外获能后精子质量评估的试剂盒及其使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105779568A(43)申请公布日2016.07.20(21)申请号201610147270.4(22)申请日2016.03.16(71)申请人四川大学华西第二医院地址610000四川省成都市武侯区人民南路3段20号(72)发明人马芳马黔红潘倩马学(74)专利代理机构成都天嘉专利事务所(普通合伙)51211代理人邹翠(51)Int.Cl.C12Q1/34(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图1页(54)发明名称一种体外获能后精子质量评估的试剂盒及其使用方法(57)摘要本发明提供了一种体外获能后精子质量评估的试剂盒及其使用方法。所述的试剂盒包括检测缓冲液1、BWW培养液、体外获能液、荧光试剂、唾液酸酶标准原液和检测缓冲液2；所述的检测缓冲液1为磷酸缓冲液或者BWW培养液；所述的检测缓冲液2为含0.05mmol/l乙酸钠和0.25μg/μl牛血清白蛋白的磷酸缓冲液。通过精子体外获能后获能液中唾液酸酶活性的检测，为临床原因不明的男性不育患者提供诊断依据及临床咨询。CN105779568ACN105779568A权利要求书1/1页1.一种体外获能后精子质量评估的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括检测缓冲液1、BWW培养液、体外获能液、荧光试剂、唾液酸酶标准原液和检测缓冲液2；所述的检测缓冲液1为磷酸缓冲液或者BWW培养液；所述的检测缓冲液2为含0.05mmol/l乙酸钠和0.25μg/μl牛血清白蛋白的磷酸缓冲液。2.根据权利要求1所述的一种体外获能后精子质量评估的试剂盒，其特征在于：所述的体外获能液为含HSA5mg/ml的HTF。3.根据权利要求1所述的一种体外获能后精子质量评估的试剂盒，其特征在于：所述的唾液酸酶标准原液为产气荚膜梭菌唾液酸酶，浓度为5U/ml。4.根据权利要求1所述的一种体外获能后精子质量评估的试剂盒，其特征在于：所述的荧光试剂是2′-4-甲基伞形酮基-α-D-N-乙酰神经氨酸钠。5.根据权利要求4所述的一种体外获能后精子质量评估的试剂盒，其特征在于：所述荧光试剂的浓度为10mM。6.根据权利要求1所述的一种体外获能后精子质量评估的试剂盒，其特征在于：所述乙酸钠的pH值为5-6。7.根据权利要求1所述的一种体外获能后精子质量评估的试剂盒的使用方法，其特征在于：具体步骤如下：A、精子的洗涤收集新鲜液化精液标本，检测缓冲液1洗涤精子，充分除去残留的精浆成分，再离心分离出精子；B、精子的体外获能向A步骤分离出的精子中加入BWW培养液，采用上游法，在5%的CO2细胞培养箱中培养，收获上游精子，计数精子数量，用体外获能液在5%的CO2细胞培养箱中孵育精子3~4h；离心分离，收取的上清液再次离心分离，收取上清液作为待测样本；C、精子获能液中唾液酸酶活性的测定（1）用检测缓冲液2将唾液酸酶标准原液按5/2.5/1.25/0.625/0.312/0mU/ml的浓度梯度将其稀释为唾液酸酶标准溶液，向检测板内依次加入各唾液酸酶标准溶液和待测样本；（2）用检测缓冲液2稀释荧光试剂，将其加入上述各唾液酸酶标准溶液和待测样本的孔内，再将检测板置于37℃，避光孵育1-2小时后，用酶标仪读取各孔荧光强度，根据唾液酸酶活性标准曲线计算出待测样本的唾液酸酶活性，最后得出唾液酸酶活性/精子数目的值即可。8.根据权利要求7所述的一种体外获能后精子质量评估的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述的检测板为96孔黑板。9.根据权利要求7所述的一种体外获能后精子质量评估的试剂盒的使用方法，其特征在于：用检测缓冲液2稀释至荧光试剂的浓度为0.05mM。10.根据权利要求7所述的一种体外获能后精子质量评估的试剂盒的使用方法，其特征在于：酶标仪在激发波长和发射波长分别为365nm和450nm的波长下读取各孔荧光强度。2CN105779568A说明书1/8页一种体外获能后精子质量评估的试剂盒及其使用方法技术领域[0001]本发明属于医疗检测技术领域，具体涉及一种体外获能后精子质量评估的试剂盒及其使用方法。背景技术[0002]随着社会工业的不断发展，不育夫妇的总发病率明显升高。2004年欧洲生殖学会统计：育龄夫妇1年内不能怀孕者占25%，其中15%寻求治疗，男方因素引起不育占50%。男性不育的病因有性功能障碍(1.7%)，精索静脉曲张(12.3%)，生殖道感染(6.6%)，先天性发育异常(2.1%)后天获得性疾病(2.6%)，内分泌紊乱(0.6%)，免疫性因素(3.1%)，其他异常(3%)，但是高达60%~75%的患者找不到原因，称为特发性男性不育，他们只表现为少精、弱精或畸形精子症等精子质量异常。不明原因的男性不育可能由于多种因素造成，如长期应激环境因素引起内分泌紊乱、活性氧和