一种牛精子获能液及精子体外获能方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106520680A(43)申请公布日2017.03.22(21)申请号201610968211.3(22)申请日2016.10.28(66)本国优先权数据201610886789.42016.10.11CN(71)申请人河南科技大学地址471003河南省洛阳市涧西区西苑路48号(72)发明人李晓霞曹平华文凤云许常龙孙俊丽禹学礼栗颖华付诗卉韩文霞武花(74)专利代理机构郑州睿信知识产权代理有限公司41119代理人胡云飞(51)Int.Cl.C12N5/076(2010.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种牛精子获能液及精子体外获能方法(57)摘要本发明公开了一种牛精子获能液及精子体外获能方法，属于家畜繁殖技术领域。牛精子获能液主要由以下组分组成：NaCl6.7500mg/mL，KCl0.3000mg/mL，NaHCO32.5000mg/mL，NaH2PO4·2H2O0.0620mg/mL，CaCl2·2H2O0.2960mg/mL，MgCl2·6H2O0.1000mg/mL，丙酮酸钠0.1120mg/mL，EDTA-Na0.0186mg/mL，酚红0.0100mg/mL，BSA6.0000mg/mL，葡萄糖1.0000mg/mL，咖啡因0.4800mg/mL，肝素0.0500mg/mL，乳酸链球菌素0.025～0.05mg/mL。该获能液能有效保证精子活力、精子质膜完整率、顶体完整率及线粒体活性，保持精子体外获能效果。CN106520680ACN106520680A权利要求书1/1页1.一种牛精子获能液，其特征在于：主要由以下组分组成：NaCl6.7500mg/mL，KCl0.3000mg/mL，NaHCO32.5000mg/mL，NaH2PO4·2H2O0.0620mg/mL，CaCl2·2H2O0.2960mg/mL，MgCl2·6H2O0.1000mg/mL，丙酮酸钠0.1120mg/mL，EDTA-Na0.0186mg/mL，酚红0.0100mg/mL，BSA6.0000mg/mL，葡萄糖1.0000mg/mL，咖啡因0.4800mg/mL，肝素0.0500mg/mL，乳酸链球菌素0.025～0.05mg/mL。2.根据权利要求1所述的获能液，其特征在于：主要由以下组分组成：NaCl6.7500mg/mL，KCl0.3000mg/mL，NaHCO32.5000mg/mL，NaH2PO4·2H2O0.0620mg/mL，CaCl2·2H2O0.2960mg/mL，MgCl2·6H2O0.1000mg/mL，丙酮酸钠0.1120mg/mL，EDTA-Na0.0186mg/mL，酚红0.0100mg/mL，BSA6.0000mg/mL，葡萄糖1.0000mg/mL，咖啡碱0.4800mg/mL，肝素0.0500mg/mL，乳酸链球菌素0.025mg/mL。3.一种牛精子体外获能方法，其特征在于：包括以下步骤：将解冻的精液与权利要求1～2中任一项所述获能液混合，于38～39℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养30～60min，即可。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述精液在38～40℃水浴条件下解冻。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述获能液在与精液混合之前，先于38～39℃、5％CO2、饱和湿度条件下预热平衡1～2h。6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述精液与获能液混合后，于39℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养45min。2CN106520680A说明书1/5页一种牛精子获能液及精子体外获能方法技术领域[0001]本发明涉及一种牛精子获能液，同时还涉及精子体外获能方法，属于家畜繁殖技术领域。背景技术[0002]随着人工授精和体外受精技术的发展，公牛的受精能力已成为影响牛繁殖效率的重要因素(Hoflack等，2006)。而精液品质分析是评估公牛生育潜力的常用程序手段(Rijsselaere等，2002)，因此牛精液品质分析尤为重要(Hoflack等，2007)。同时精液品质的优劣也与母牛的受胎率有紧密联系，它是提高牛繁殖效率的关键因素。影响公牛精液品质的因素诸多，如年龄、营养、季节和获能效果等。而保证精子获能的有效前提是在获能液中添加抑菌剂。目前，在体外获能液中添加的抑菌剂基本都是抗生素类物质。如公布号CN103173406A的发明专利公开的一种牦牛精子获能液，由TALP基础液、BSA(6mg/mL)和丙酮酸钠(1.0mM)组成，TALP基础液为：氯化钠100mM、氯化钾3.1mM、氯化钙2.1mM、氯化镁0.4mM、磷酸二氢钠0.29mM、乳酸钠21.6mM、Hepes10mM、碳酸氢钠25mM、