一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106011208A(43)申请公布日2016.10.12(21)申请号201610489372.4(22)申请日2016.06.29(71)申请人肖建喜地址730030甘肃省兰州市城关区雁北路兴隆滨河苑4-1-2703申请人杨德庆(72)发明人肖建喜杨德庆李婷婷李红霞(74)专利代理机构北京轻创知识产权代理有限公司11212代理人王新生(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K14/78(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法(57)摘要本发明提供了一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，包括原料处理、第一种酶定向酶解、第二种酶定向酶解及纯化处理的步骤。所述第一种酶为木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶中的一种或几种，所述第二种酶为木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶或胰蛋白酶中的一种或几种。本发明利用超高压复合酶直接提取制备胶原蛋白肽，其工艺流程简单，时间短，能耗少，成本低，绿色环保，且制备的胶原肽不变性，产率高，分子量小，活性高，易于被人体吸收利用。CN106011208ACN106011208A权利要求书1/1页1.一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤[1]原料处理：将牦牛骨皮原料进行清洗，去除异物，然后常温干燥，粉碎后得粒度为50～400目的原料粉末；步骤[2]第一种酶定向酶解：将牦牛骨皮的粉末以料液重量比1:1～12的比例分散于第一种酶溶液中，调整溶液pH为2.0-9.0，控制超高压反应器的压力为150-500Mpa，在温度为35～60℃的条件下，酶解0.5-6hrs，得第一酶解液；步骤[3]第二种酶定向酶解：将第一酶解液的pH调为第二种酶的最适pH，加入第二种酶，控制超高压反应器的压力为150～600Mpa，在温度为40～65℃的条件下，酶解0.1-5hrs，得第二酶解液；步骤[4]纯化处理：所述第二酶解液经灭活处理后，经膜过滤，冷冻干燥，制得所述小分子量胶原蛋白活性肽。2.根据权利要求1所述的一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，其特征在于：步骤[1]中所述原料粉末的粒度为50～150目。3.根据权利要求1所述的一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，其特征在于：所述第一种酶溶液中的酶为木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，其特征在于：所述第二种酶为木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶或胰蛋白酶中的一种或几种。5.根据权利要求1所述的一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，其特征在于：所述第一种酶溶液中酶的加入量为1500-6000U/g。6.根据权利要求1所述的一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，其特征在于：步骤[3]中加入第二种酶后酶液中第二种酶的含量为1500-6000U/g。7.根据权利要求1所述的一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，其特征在于：步骤[2]中料液重量比为1:2～8，溶液pH为2.4-7.8，控制超高压反应器的压力为200-400Mpa，在温度为45-55℃的条件下，酶解0.5-2hrs。8.根据权利要求1所述的一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，其特征在于：步骤[3]中溶液pH调为其最适pH，控制超高压反应器的压力为200-400Mpa，在温度为45-55℃的条件下，酶解0.1-2hrs。9.根据权利要求1所述的一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法，其特征在于：步骤[4]中所述膜过滤选择截留的分子量为1500Da。2CN106011208A说明书1/4页一种酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法技术领域[0001]本发明涉及生物工程技术领域，特别是一种复合酶分步定向酶解牦牛骨皮制备小分子量胶原蛋白活性肽的方法。背景技术[0002]胶原蛋白是一种生物性高分子物质，在动物细胞中扮演结合组织的重要角色。作为生物科技产业最具关键性的原材料之一，胶原蛋白需求量十分庞大，其应用领域包括生物医药、化妆品、保健品、食品和研究用途等。胶原蛋白按生产原料，可以分为鱼鳞胶原蛋白、皮胶原蛋白和骨胶原蛋白等；按产品的分子量，又可以分为大分子量的胶原蛋白和小分子量的胶原肽，其中小分子量的胶原肽更易被人体吸收利用，因而具有更高的产品附加值，是胶原蛋白产品的发展方向。[0003]胶原蛋白的生产主要通过酶解转化动物原料而提取。传统工艺