预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲,该文档总共16页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105994254A(43)申请公布日2016.10.12(21)申请号201610615577.2(22)申请日2016.07.28(71)申请人广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司地址510000广东省广州市广州开发区广州国际生物岛螺旋四路一号生产区第五层502单元(72)发明人陈海佳王一飞葛啸虎万桦张维敏(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人赵青朵(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图6页(54)发明名称一种DC细胞的冻存液及冻存方法(57)摘要本发明属于细胞生物学领域,具体涉及一种DC细胞的冻存液及冻存方法。本发明所述DC细胞的冻存液,包括海藻糖、牛血清白蛋白、丙二醇、DMSO、低分子右旋糖酐、DMEM培养基和维生素C。本发明所述DC细胞的冻存方法为向DC细胞中加入本发明所述冻存液,混匀后冻存。采用本发明所述冻存液冻存DC细胞,明显提高了DC细胞的冻存效果,不管是复苏后的活率还是增殖方面都可以保持较好的状态。CN105994254ACN105994254A权利要求书1/2页1.一种DC细胞的冻存液,包括海藻糖、牛血清白蛋白、丙二醇、DMSO、低分子右旋糖酐、DMEM培养基和维生素C。2.根据权利要求1所述的冻存液,其特征在于,所述冻存液由下述成分组成:3.根据权利要求2所述的冻存液,其特征在于,所述冻存液由下述成分组成:4.根据权利要求2所述的冻存液,其特征在于,所述冻存液由下述成分组成:5.根据权利要求2所述的冻存液,其特征在于,所述冻存液由下述成分组成:2CN105994254A权利要求书2/2页6.一种DC细胞的冻存方法,向DC细胞中加入权利要求1所述冻存液,混匀后冻存。7.根据权利要求6所述的冻存方法,其特征在于,所述冻存液的加入量为至DC细胞密度为1×107-3×107。8.根据权利要求6所述的冻存方法,其特征在于,所述冻存具体为放入-80℃冰箱,24小时后转入液氮保存。9.根据权利要求6所述的冻存方法,其特征在于,所述DC细胞由单个核细胞培养得到。10.根据权利要求9所述的冻存方法,其特征在于,所述培养具体为PBMC用RPMI1640培56养基重悬至密度为5×10-1×10/ml,37℃,5%CO2培养3小时;弃去非贴壁细胞,将贴壁细胞用含有10%FBS、500U/ml的GM-CSF和500U/mlIL-4的RPMI1640培养基培养6天,收集DC细胞。3CN105994254A说明书1/7页一种DC细胞的冻存液及冻存方法技术领域[0001]本发明属于细胞生物学领域,具体涉及一种DC细胞的冻存液及冻存方法。背景技术[0002]DC细胞又叫做树突状细胞,属于已知细胞中抗原提呈能力最强的一种细胞,因此有许多肿瘤病患的临床治疗方案都以DC细胞作为研究对象。但是DC细胞培养需要较长时间,并且冻存后的血液无法培养出DC细胞,因此在治疗肿瘤病人的时候,必须抽取病人的新鲜血液然后再通过14-30天的培养过程来扩增细胞再进行回输。这样就会有一些问题存在,首先就是肿瘤病人血液质量较差,很难扩增出足够的DC细胞;其次扩增时间较长,病人等待时间过长等。因此如果能够在病人情况较好的时候抽取外周血,并培养出DC细胞并冻存起来,在需要的时候复苏细胞进行回输,便可以大大方便治疗过程,提高疗效。[0003]然而现在尚无明确能够冻存DC细胞的冻存液配方,通常采用通用的90%FBS+10%DMSO进行DC细胞的冻存。但90%FBS+10%DMSO的冻存液冻存DC细胞效果很差,复苏后DC细胞的活率偏低,并且无法再继续增殖。现有冻存液中含有大量牛血清,有可能会引起严重的过敏反应,并且带来了外源性病毒的风险,因此无法进行临床使用。而且现有冻存液中DMSO含量过高,在临床输注时风险较大。发明内容[0004]有鉴于此,本发明的目的在于针对现有技术存在的问题,提供一种DC细胞的冻存液及冻存方法。[0005]为了实现本发明的目的,本发明采用如下技术方案:[0006]一种DC细胞的冻存液,包括海藻糖、牛血清白蛋白、丙二醇、DMSO、低分子右旋糖酐、DMEM培养基和维生素C。[0007]作为优选,所述冻存液由下述成分组成:[0008][0009]在一些实施方案中,所述冻存液由下述成分组成:4CN105994254A说明书2/7页[0010][0011]在一些实施方案中,所述冻存液由下述成分组成:[0012][0013]在一些实施方案中,所述冻存液由下述成分组成:[0014][0015][0016]本发明还提供了一种DC细胞的冻存方法,向DC细胞中加入本发明所述冻存液,混匀后冻存。[0017]其中,本发明所述的冻存方法