一种心肌干细胞的冻存液及冻存方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106417258A(43)申请公布日2017.02.22(21)申请号201610897477.3(22)申请日2016.10.15(71)申请人成都育芽科技有限公司地址610041四川省成都市高新区天府大道中段1388号1栋8层866号(72)发明人向红先(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称一种心肌干细胞的冻存液及冻存方法(57)摘要本发明提供了一种心肌干细胞的冻存液，该冻存液由DMEM基础培养基、胎牛血清、维生素E、海藻糖和羟乙基淀粉组成；所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的0.8-2.0%；所述维生素E的浓度为18-25μM；所述海藻糖的浓度为0.1-0.3M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的10-13%。本发明还提供了利用上述冻存液对心肌干细胞进行冻存的方法。本发明的冻存液没有添加DMSO等有毒的保护剂，对于心肌干细胞的冻存而言有着十分优秀的细胞复苏率，最高可达94.55%。CN106417258ACN106417258A权利要求书1/1页1.一种心肌干细胞的冻存液，其特征在于，所述冻存液由DMEM基础培养基、胎牛血清、维生素E、海藻糖和羟乙基淀粉组成；所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的0.8-2.0%；所述维生素E的浓度为18-25μM；所述海藻糖的浓度为0.1-0.3M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的10-13%。2.根据权利要求1所述的冻存液，其特征在于，所述维生素E的浓度为20-22μM；所述海藻糖的浓度为0.15-0.25M。3.根据权利要求1或2所述的冻存液，其特征在于，所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的11-12%。4.根据权利要求1所述的冻存液，其特征在于，所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的1.5%；所述维生素E的浓度为21μM；所述海藻糖的浓度为0.2M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的11.5%。5.一种利用权利要求1-4任一项所述冻存液对心肌干细胞进行冻存的方法，其特征在于，所述方法为：将所述冻存液预冷至4℃后，利用预冷后的冻存液将心肌干细胞稀释至浓度为0.1-1.0×106个心肌干细胞，于4℃下预冷10-30min后，在-80℃下冻存24h，转移至液氮罐中保存。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，心肌干细胞的浓度为5.0×105个。2CN106417258A说明书1/2页一种心肌干细胞的冻存液及冻存方法[0001]技术领域[0002]本发明属于细胞技术领域，具体涉及一种心肌干细胞的冻存液及冻存方法。背景技术[0003]心肌梗死是严重威胁人类健康的主要疾病之一，一旦发生将造成心脏机能不可逆的改变，早期出现心肌细胞坏死、溶解，后期出现心脏扩大，梗死心肌组织瘢痕形成，心功能下降，严重影响人们的生活质量。目前现有的治疗方法包括：药物治疗、冠脉介入治疗以及冠脉旁路移植术等，尽管上述疗法能够改善患者的症状，但是不能从根本上解决心肌细胞及血管的再生修复问题。[0004]目前，心肌干细胞移植成为心肌再生疗法的新热点，该技术有望给心肌梗死患者带来福音。然而，现有的心肌干细胞的冻存方法的效果却不太理想，未发现专门针对于心肌干细胞的冻存液，所用的冻存液通常含有DMSO等对细胞有毒性的保护剂，不利于心肌干细胞的复苏。这极大的限制了利用心肌干细胞进行心肌梗死等疾病的研究和应用。[0005]因此，本领域亟待研发一种针对于心肌干细胞的无毒的冻存液。发明内容[0006]针对现有技术的缺点，本发明的目的之一在于提供一种心肌干细胞的冻存液，该冻存液由DMEM基础培养基、胎牛血清、维生素E、海藻糖和羟乙基淀粉组成；所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的0.8-2.0%；所述维生素E的浓度为18-25μM；所述海藻糖的浓度为0.1-0.3M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的10-13%。[0007]优选的，所述维生素E的浓度为20-22μM；所述海藻糖的浓度为0.15-0.25M。[0008]优选的，所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的11-12%。[0009]最优的，所述胎牛血清的添加量为DMEM基础培养基重量的1.5%；所述维生素E的浓度为21μM；所述海藻糖的浓度为0.2M；所述羟乙基淀粉的添加量为DMEM基础培养基重量的11.5%。[0010]本发明的另外一个目的还在于提供利用上述冻存液对心肌干细胞进行冻存的方法，该方法为：将所述冻存液预冷至4℃后，利用预冷后的冻存液将心肌干细胞稀释至浓度为0.1-1.0×106个心肌干细胞，于4℃下预冷10-30mi