一种重组牛乳铁蛋白肽衍生肽及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106519022A(43)申请公布日2017.03.22(21)申请号201611007504.1C12P21/02(2006.01)(22)申请日2016.11.16A61K38/40(2006.01)A61P31/04(2006.01)(71)申请人成都中医药大学C12R1/84(2006.01)地址611130四川省成都市温江区柳台大道1166号(72)发明人吕自力王亮郭爱珍单旭东刘小章(74)专利代理机构成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)51222代理人张娟刘华玲(51)Int.Cl.C07K14/79(2006.01)C12N15/12(2006.01)C12N15/81(2006.01)C12N1/19(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图4页(54)发明名称一种重组牛乳铁蛋白肽衍生肽及其制备方法和用途(57)摘要本发明提供了一种重组牛乳铁蛋白肽衍生肽，它的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。本发明提供的重组牛乳铁蛋白肽衍生肽抑菌活性显著优于牛乳铁蛋白肽母肽，尤其对葡萄球菌具有良好的抑制效果，市场前景好。CN106519022ACN106519022A权利要求书1/1页1.一种重组牛乳铁蛋白肽衍生肽，其特征在于：它的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。2.一种牛乳铁蛋白肽衍生肽的核苷酸序列，其特征在于：它编码SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于：它的序列如SEQIDNO：2所示。4.一种重组载体，其特征在于：它包含权利要求2或3所示的核苷酸序列。5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述的重组载体是重组pPIC9K质粒。6.一种重组菌，其特征在于：它包含权利要求4或5所述的重组载体。7.根据权利要求6所述的重组菌，其特征在于：所述的重组菌是重组酵母菌；优选地，所述重组酵母菌为重组毕赤酵母菌GS115。8.一种制备权利要求1所述重组牛乳铁蛋白肽衍生肽的方法，其特征在于：包含如下步骤：a、取权利要求6或7所述的重组菌，接种到BMGY培养基上，30℃，200r/min振荡培养至OD600为2.5时，离心，取沉淀；b、在步骤a的沉淀中加入BMGY培养基，重悬，加入甲醇，并保持培养基中甲醇终浓度为0.5-2％(V/V)，诱导培养72小时；c、离心，收集上清液，分离纯化，即可。9.权利要求1所述重组牛乳铁蛋白肽衍生肽在制备抑菌剂中的用途。10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述抑菌剂为抑制葡萄球菌的制剂；进一步地，所述葡萄球菌为金黄色葡萄球菌。2CN106519022A说明书1/5页一种重组牛乳铁蛋白肽衍生肽及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明属于基因工程领域，具体涉及一种重组牛乳铁蛋白肽衍生肽及其制备方法和用途。背景技术[0002]牛乳铁蛋白肽(LfcinB)是位于牛乳铁蛋白(LfB)N-末端长度为25个氨基酸残基的阳离子抗菌肽(氨基酸序列为：FKCRRWQWRMKKLGAPSITCVRRAF)，由胃蛋白酶降解产生，具有多种生理功能，如广谱抗菌性、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等，而且LfcinB不易产生抗药性，在食品，药品，动物饲料等领域有着广阔的应用前景。[0003]从20世纪80、90年代至今，牛乳铁蛋白肽一直是研究者们关注的热点，研究者试图通过提高LfcinB的抑菌活性，以得到新型的抗生素替代物。采用的手段多是将LfcinB异源表达以提高其活性。另外也有对LfcinB进行结构优化以获得活性更好的LfcinB衍生肽的研究，只是由于任何一个氨基酸的替换都可能会改变LfcinB肽链的空间结构，从而改变其性质，甚至降低其活性。如何通过结构改造得到具有高抑菌活性的LfcinB衍生肽是目前急需解决的问题。发明内容[0004]本发明的目的在于提供一种重组牛乳铁蛋白肽衍生肽(LfcinBD)及其制备方法和用途。[0005]本发明提供了一种重组牛乳铁蛋白肽衍生肽，它的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。[0006]SEQIDNO：1牛乳铁蛋白肽衍生肽的氨基酸序列，序列为：FKCRRWQWRWKKLGAPSITCVRRAF。[0007]本发明还提供了一种牛乳铁蛋白肽衍生肽的核苷酸序列，它编码SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。[0008]其中，它的序列如SEQIDNO：2所示。[0009]SEQIDNO：2牛乳铁蛋白肽衍生肽的核苷酸序列，序列为：TTCAAGTGCAGAAGATGGCAGTGGAGATGGAAGAAGTTGGGTGCTCCATCTATCACCTGCGTTAGAAGAGCTTTC。[0010]本发明还提供了一种重组载体，它包含上述核苷酸序列。[0011]其中，