一种叶酸靶向载药纳米金颗粒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108355140A(43)申请公布日2018.08.03(21)申请号201810507606.2A61P35/00(2006.01)(22)申请日2018.05.24(71)申请人青岛大学地址266071山东省青岛市崂山区香港东路7号青岛大学(72)发明人崔莲花杨大鹏刘树亮葛南(74)专利代理机构青岛申达知识产权代理有限公司37243代理人霍本俊(51)Int.Cl.A61K47/69(2017.01)A61K47/64(2017.01)A61K47/54(2017.01)A61K47/52(2017.01)A61K31/704(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图5页(54)发明名称一种叶酸靶向载药纳米金颗粒及其应用(57)摘要本发明公开了一种叶酸靶向载药纳米金颗粒及其应用。该叶酸靶向载药纳米金颗粒以纳米金颗粒作为载体，作为载体的纳米金颗粒为以牛血清白蛋白为模板合成的纳米金颗粒，所述的纳米金颗粒修饰有叶酸分子且负载有阿霉素，纳米金颗粒以顺乌头酸酐作为连接键结合阿霉素。该复合物对表面叶酸受体过量表达的肿瘤细胞有较好的杀伤作用，对癌症的靶向治疗具有很好的应用价值。CN108355140ACN108355140A权利要求书1/2页1.一种叶酸靶向载药纳米金颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备BSA修饰的纳米金颗粒：以牛血清白蛋白为模板合成纳米金颗粒；(2)纳米金颗粒负载阿霉素：步骤(1)制得的纳米金颗粒以顺乌头酸酐作为连接键结合阿霉素，得载药纳米金颗粒；(3)叶酸修饰载药纳米金颗粒：以叶酸作为靶向分子，修饰步骤(2)所得的载药纳米金颗粒。2.如权利要求1所述的一种叶酸靶向载药纳米金颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备BSA修饰的纳米金颗粒：将牛血清白蛋白溶液与氯金酸溶液混合，室温下搅拌均匀，再加入抗坏血酸继续搅拌至溶液由浅蓝色先变为无色再变为蓝紫色，即得纳米金溶胶；(2)纳米金颗粒负载阿霉素：将盐酸阿霉素溶解于蒸馏水中冰浴得阿霉素溶液，将顺乌头酸酐溶解于1,4-二氧六环中，缓慢加入阿霉素溶液中搅拌均匀，向混合溶液中加入NaOH迅速将溶液的pH调至9.0±0.3，在冰水浴中反应10-60min，然后加入HCl将pH调至7.0±0.3，搅拌均匀，随后继续滴加HCl直至形成较大沉淀，冰浴10-60min后，离心去除上清液，得到沉淀物，所得沉淀物与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺一起溶解于蒸馏水中，室温黑暗中搅拌数小时，所得混合溶液与步骤(1)所得的纳米金溶胶混合后继续黑暗中搅拌数小时，待反应完成之后，通过葡萄糖凝胶G-25分离去除多余的牛血清蛋白和阿霉素，即得载药纳米金溶胶；(3)叶酸修饰载药纳米金颗粒：将叶酸溶解于二甲基亚砜中得叶酸溶液，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合在室温黑暗中搅拌数小时后与叶酸溶液混合得混合溶液，将步骤(2)所得的载药纳米金溶胶加入该混合溶液，室温黑暗中搅拌反应完成后，通过葡萄糖凝胶G-25分离去除多余的叶酸，即得到叶酸修饰载药纳米金颗粒的分散液。3.如权利要求2所述的一种叶酸靶向载药纳米金颗粒的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1)制备BSA修饰的纳米金颗粒：将10mL浓度为5mg/mL的牛血清白蛋白溶液与1mL浓度为10mM的氯金酸溶液混合，室温下置于磁力搅拌器上搅拌30min，转速为1000rpm，然后加入20mg抗坏血酸继续搅拌2h，溶液由最初的浅蓝色先变为无色再变为蓝紫色，即得纳米金溶胶。4.如权利要求2所述的一种叶酸靶向载药纳米金颗粒的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)纳米金颗粒负载阿霉素：将7mg盐酸阿霉素溶解于4mL蒸馏水中冰浴得阿霉素溶液，将5mg顺乌头酸酐溶解于200μL1,4-二氧六环中，然后缓慢加入阿霉素溶液中搅拌均匀，用0.5MNaOH迅速将溶液的pH调至9.0，溶液在冰水浴中反应20min，然后用1MHCl将溶液pH调至7.0，搅拌30min，随后继续滴加HCl直至形成较大沉淀，反应物继续冰浴15min后，离心去除上清，得到沉淀物，所得沉淀物与7mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、3mgN-羟基琥珀酰亚胺一起溶解于3mL蒸馏水中，室温黑暗中搅拌4h得混合溶液，将混合溶液与2mL步骤(1)所得的纳米金溶胶混合后继续黑暗中搅拌16h，反应完成之后，通过葡萄糖凝胶G-25分离去除多余的牛血清蛋白和阿霉素，即得到载药纳米金溶胶。5.如权利要求2所述的一种叶酸靶向载药纳米金颗粒的制备方法，其特征在于，所述的2CN108355140A权利要求书2/2页步骤(3)叶酸修饰载药纳米金颗