产生牛妊娠相关糖蛋白特异性单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株、单克隆抗体、试剂盒及检测.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109295003A(43)申请公布日2019.02.01(21)申请号201811051878.2C07K16/40(2006.01)(22)申请日2018.09.10G01N33/577(2006.01)G01N33/573(2006.01)(83)生物保藏信息C12R1/91(2006.01)CCTCCNO：C20181702018.08.26CCTCCNO：C20181712018.08.26(71)申请人吉林医药学院地址132013吉林省吉林市吉林大街5号申请人重庆探生科技有限公司(72)发明人蔡建辉徐淞李艳胡川闽孙美艳王会岩刘静(74)专利代理机构重庆志合专利事务所(普通合伙)50210代理人胡荣珲(51)Int.Cl.C12N5/20(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称产生牛妊娠相关糖蛋白特异性单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株、单克隆抗体、试剂盒及检测(57)摘要本发明涉及产生牛妊娠相关糖蛋白特异性单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株、单克隆抗体、试剂盒及检测，其为两株产生牛PAG特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由该杂交瘤细胞株产生的两种特异性单克隆抗体H4和G7，检测牛PAG的试剂盒及其检测方法，该细胞株保藏编号分别为CCTCCNO：C2018170、CCTCCNO：C2018171。该试剂盒包含上述的两种单克隆抗体，并且，以H4作为捕获抗体，以G7作为检测抗体进行检测。在检测奶牛体内PAG浓度时，与奶牛体内的天然PAG具有较好的识别能力和结合能力，并通过建立标准的双抗体夹心ELISA体系，能够准确检测标本中的牛PAG，并以此成功建立了检测牛PAG的双抗体夹心ELISA方法，对多种形式的PAG免疫检测试剂的进一步研究具有很大的意义。CN109295003ACN109295003A权利要求书1/1页1.一种产生牛PAG特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，于2018年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C2018170。2.一种单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株产生。3.一种产生牛PAG特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，于2018年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C2018171。4.一种单克隆抗体，其特征在于，由权利要求3所述的杂交瘤细胞株产生。5.权利要求1或3所述的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，由纯化的天然牛PAG蛋白免疫Balb/c小鼠后小鼠脾脏B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞sp2/0融合后培养产生。6.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所述的单克隆抗体和权利要求4所述的单克隆抗体。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，用于检测牛PAG。8.一种采用权利要求6所述的试剂盒检测奶牛体内PAG浓度的方法，其特征在于，采用权利要求2所述的单克隆抗体作为捕获抗体，采用权利要求4所述的单克隆抗体作为检测抗体。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述检测抗体采用HRP标记。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述HRP标记包括：将所述检测抗体与HRP按质量比1:1混合后，加入碳酸钠缓冲液，调节至预定的PH值后进行反应。2CN109295003A说明书1/7页产生牛妊娠相关糖蛋白特异性单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株、单克隆抗体、试剂盒及检测技术领域[0001]本发明涉及生物医药工程技术领域，并且更具体地，涉及到产生牛PAG特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，特异性单克隆抗体，检测牛PAG的试剂盒及其检测方法。背景技术[0002]早期妊娠判断是保证和提高奶牛繁殖率和产奶量的关键环节之一。在奶牛配种或人工受精后，都需要及时进行早期妊娠判断。空怀牛发现越早，就能越早进行第二次发情管理和配种，缩短配种间隔，从而提高妊娠率，避免或减少母牛早期妊娠缺失造成的各种损失。因此牛的早期妊娠诊断一直是畜牧业发展中值得高度关注的重要问题。[0003]传统的牛早孕判断主要包括三种方法：直肠触诊法、超声波诊断法、血液或牛奶中孕酮检测法。直肠触诊法成本低，能马上得到结果，如果操作者的经验和水平高，该法的准确率可达95％以上，通常在配种后35～65天由兽医来进行首次检查，并在较多时候被作为诊断妊娠的标准。但是该方法对操作人员或者牧场兽医有较高技术要求，一般饲养人员难以掌握，而且该操作对早期胚胎具有一定的侵害性，有结果表明该操作与胚胎死亡之间存在明确的相关性。超声波诊断法与直肠触诊法相比危害较小，操作简便，准确率高。有研究资料表明在配种后21～25天检测，妊娠的敏感性和特异性分别是44.8％和82.3％；如果在配种后26～33天检测，其敏