杂交瘤细胞株、及其产生的单克隆抗体和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110003325A(43)申请公布日2019.07.12(21)申请号201910254282.0G01N33/569(2006.01)(22)申请日2019.03.31G01N33/577(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO:C2019462019.03.21(71)申请人四川迈克生物新材料技术有限公司地址611731四川省成都市高新区（西区）安和二路8号1栋B座1层(72)发明人黄家菊蔡泉蜀王磊干盈盈许健平(74)专利代理机构北京汉鼎理利专利代理事务所(特殊普通合伙)11618代理人潘满根(51)Int.Cl.C07K16/08(2006.01)C12N5/20(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图1页(54)发明名称杂交瘤细胞株、及其产生的单克隆抗体和应用(57)摘要本发明公开了一种杂交瘤细胞株、及其产生的单克隆抗体和应用。所述杂交瘤细胞株生产结合乙肝表面抗原的单克隆抗体。本发明制备的可分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体能与目的蛋白发生特异性的结合，该高效价、高灵敏度、高特异性、高稳定性的单克隆抗体能在胶体金平台(双抗体夹心法)快速定性检测血清或血浆或全血中的乙型肝炎病毒表面抗原。CN110003325ACN110003325A权利要求书1/1页1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株的保藏号为：CCTCCNO:C201946，其生产结合乙肝表面抗原的单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，所杂交瘤细胞株通过以下方法制备：步骤1：用天然HBsAg免疫小鼠，采血测定免疫小鼠的血清效价大于1：108后，可用于融合；步骤2：融合前，所述免疫小鼠用HBsAg溶液通过尾静脉追加免疫；步骤3：取追加免疫后的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合并培养，并用HAT筛选得到稳定的杂交瘤细胞株；和步骤4：筛选阳性细胞株，克隆得稳定杂交瘤细胞株，从中选择得到保藏号为：CCTCCNO:C201946的杂交瘤细胞株。3.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，步骤1中用天然HBsAg免疫小鼠包括：先用HBsAg抗原溶液与弗氏完全佐剂混合后进行免疫；然后用HBsAg抗原溶液与弗氏不完全佐剂进行增强免疫，以后每隔一周增强免疫一次，直至所有小鼠血清效价大于1：108。4.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，在步骤3的融合细胞培养中加入饲养细胞，以正常的鼠腹腔巨噬细胞作饲养细胞。5.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0经8-氮鸟嘌呤筛选后，培养至对数生长期，然后悬浮、离心和培养基培养获得。6.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，在步骤3的细胞融合中加入PEG，优选地为PEG4000。7.一种结合乙肝表面抗原的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏编号为CCTCCNO:C201946的杂交瘤细胞株产生。8.根据权利要求7所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体还包括所述单克隆抗体的片段和其衍生物。9.根据权利要求7-8任一所述的单克隆抗体在制备乙型病毒性肝炎或乙肝相关疾病的病情评估的试剂或试剂盒中的应用。2CN110003325A说明书1/9页杂交瘤细胞株、及其产生的单克隆抗体和应用技术领域[0001]本发明涉及生物制剂领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株、及其产生的单克隆抗体和应用。背景技术[0002]乙型肝炎是一种严重危害人类健康的疾病，其严重后果是直接导致急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化、肝衰竭或死亡，并与某些人群的肝细胞癌(HCC)的发生密切相关，构成复杂的乙型肝炎疾病谱。乙型肝炎病毒可通过母婴传播，危害极大。大样本调查显示我国乙肝表面抗原(HBsAg)携带率约10％，慢性无症状HBV携带者(AsC)可能超过1.2亿人。因此，预防和控制乙型肝炎长期以来一直是我国卫生防疫工作的重要任务。[0003]乙肝HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBsAg是国内医院最常用的乙型肝炎病毒(HBV)感染检测血清标志物。其中HBsAg是乙型肝炎病毒的结构成分之一，是乙型肝炎病毒感染的直接标志物，医院通常检测乙肝HBsAg来检查是否感染乙型肝炎及感染的具体情况。现有的HBsAg检测方法主要是酶联免疫吸附试验(ELISA法)、化学发光免疫分析法(CLIA法)、免疫放射法(RIA)、胶体金免疫层析法(GICA法)等。这些免疫学技术的检测对象是病人血清或血浆或全血中的HBsAg，依赖于HBsAg与单克隆抗体的结合。另外，样品中难以避免的血红蛋白、胆红素、甘油三酯等成分，往往也会干扰单克隆抗体与抗原的结合，从而对实验室或临床