分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其单克隆抗体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102965343A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102965343A(43)申请公布日2013.03.13(21)申请号201210433949.1C12R1/91(2006.01)(22)申请日2012.11.02(83)生物保藏信息CCTCCNO:C20121082012.09.04CCTCCNO:C20121072012.09.04(71)申请人扬州大学地址225009江苏省扬州市大学南路88号(72)发明人焦新安陈祥徐正中殷月兰孙林潘志明黄金林耿士忠李求春(74)专利代理机构上海光华专利事务所31219代理人许亦琳余明伟(51)Int.Cl.C12N5/20(2006.01)C07K16/24(2006.01)G01N33/577(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书88页页附图附图11页(54)发明名称分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其单克隆抗体及其应用(57)摘要本发明提供了一种分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其单克隆抗体及其应用。本发明的分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株保藏号为CCTCCNO：C2012107。本发明的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有效价高、特异性好、与天然抗原亲和力强的优势，基于此建立的BoIFN-γELISPOT检测试剂盒具有较好的灵敏度和特异性，用作牛机体免疫状态的评价及感染性疾病诊断相关的研究。CN10296534ACN102965343A权利要求书1/1页1.一种分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCCNO：C2012107。2.一种牛γ干扰素单克隆抗体，由保藏号为CCTCCNO：C2012107的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。3.如权利要求1所述分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株或权利要求2所述牛γ干扰素单克隆抗体在制备牛疫病的检测试剂或诊断试剂中的应用。4.一种牛γ干扰素的ELISPOT检测试剂盒，所述试剂盒包括：a.选自以下任一：1）微孔滤膜板，以及权利要求2所述牛γ干扰素单克隆抗体；2）包被有权利要求2所述牛γ干扰素单克隆抗体的微孔滤膜板；b.生物素标记牛γ干扰素单克隆抗体。5.如权利要求4所述牛γ干扰素的ELISPOT检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记牛γ干扰素单克隆抗体中的牛γ干扰素单克隆抗体不同于权利要求2所述牛γ干扰素单克隆抗体。6.如权利要求4所述牛γ干扰素的ELISPOT检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记牛γ干扰素单克隆抗体中的牛γ干扰素单克隆抗体由保藏号为CCTCCNO：C2012108的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。7.如权利要求4-6任一所述牛γ干扰素的ELISPOT检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括下列试剂中的一种或多种：1）亲和素-碱性磷酸酶结合物；2）底物液；3）洗涤液。8.如权利要求7所述牛γ干扰素的ELISPOT检测试剂盒，其特征在于，所述底物液为NBT/BCIP。2CN102965343A说明书1/8页分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其单克隆抗体及其应用技术领域[0001]本发明涉及分泌牛γ干扰素单抗的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体及其在免疫检测及诊断领域的应用。背景技术[0002]γ干扰素（IFN-γ）主要是由被有丝分裂原或特异性抗原刺激而活化的CD4+Th1细胞、CD8+T细胞及NK细胞等产生的细胞因子，具有广泛抗病毒、抗肿瘤活性以及免疫调节功能，是机体防御系统的重要组成部分。研究表明内源性IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映机体的细胞免疫状态，而抗原特异性的IFN-γ反应则可以作为机体针对某种特定外来抗原的细胞免疫状态的指标。[0003]IFN-γ及其单克隆抗体（McAb）在畜牧兽医领域有着广泛的应用，将基因重组牛IFN-γ（rBoIFN-γ）及其McAb用于牛病的研究，抗原特异性的BoIFN-γ试验已在很多发达国家被用于多种牛疫病的检测，尤以在牛结核病诊断中的应用最为广泛，相关的研究也最为深入。[0004]IFN-γ的免疫学检测是在特异性抗IFN-γMcAb的基础上建立的用于对样本中的IFN-γ进行定性定量分析的实验方法。应用不同的单抗标记物和检测技术，已经开发出多种方法，如反向被动血凝试验（RPH），酶免疫分析法（EIA），酶联免疫吸附法（ELISA），酶联免疫斑点法（ELISPOT），流式细胞术（FCM）分析法等。[0005]1983年建立的酶联免疫斑点实验（Enzyme-linkedImmunospot，简称ELISPOT）技术具有高度的敏感性和应用广泛性，已成为近年来最吸引人的免疫检测方法之一，在疫苗的研发、临床诊断以