牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细胞株及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105838679A(43)申请公布日2016.08.10(21)申请号201610225967.9G01N33/531(2006.01)(22)申请日2016.04.12(83)生物保藏信息CGMCCNo.120342016.01.27(71)申请人北京瑞鹰生物技术有限公司地址101111北京市大兴区北京经济技术开发区科创六街88号生物医药园E1-506室(72)发明人杨春江于在江马孝斌秦堃赵荣茂莫勋李妍(51)Int.Cl.C12N5/20(2006.01)C07K16/18(2006.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表5页附图1页(54)发明名称牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细胞株及其应用(57)摘要一种牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细胞株，其特征在于：所述菌株的登记入册保藏编号为CGMCCNo.12034，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2016年1月27日。菌株PAG109在检测牛怀孕妊娠的应用，可以用来快速检测牛怀孕妊娠。CN105838679ACN105838679A权利要求书1/1页1.一种牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记入册的编号为CGMCCNo.12034。2.一种PAG特异性单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体是由权利要求1所述的杂交瘤细胞株CGMCCNo.12034分泌产生的。3.根据权利要求2所述的PAG特异性单克隆抗体，其特征在于，制备该单克隆抗体所用的基因片段如SEQIDNo.1所示，制备该单克隆抗体的蛋白序列如SEQIDNo.2所示。4.权利要求2所述的PAG特异性单克隆抗体在检测或分离PAG蛋白中的应用。5.根据权利要求1所述的牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细胞株或权利要求2所述的PAG特异性单克隆抗体在制备检测PAG蛋白试纸条中的应用。2CN105838679A说明书1/7页牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细胞株及其应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，涉及到一种牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细胞株及其应用。背景技术[0002]早期妊娠诊断是提高奶牛繁殖率和产奶量的重要措施。一般人工受精或配种后，需要及时进行早期妊娠诊断，避免母牛早期妊娠缺失造成的生产损失。传统的牛早孕诊断检测主要依靠初诊和超声波仪器来进行，在准确性和时效性上有一定缺陷，并且两种诊断均对操作人员或者牧场兽医有较高要求，一般饲养人员难以掌握。养殖实践中通过加强妊娠母畜的管理、保证顺利分娩，同时对未妊娠母畜及时补配或进行必要处理可缩短产仔间隔并明显提高繁殖效率。因此开发无创且快速简便的妊娠诊断技术已成为必然趋势。[0003]奶牛妊娠后，胎盘滋养层双核细胞在于母体子宫上皮细胞融合时，会释放出多种信号蛋白，其中常见的并且被广泛研究的有妊娠相关糖蛋白（pregnancyassociatedglycoproteins,PAG），牛早孕因子（earlypregnancyfactor,EPF）、妊娠特异性蛋白B（pregnancyspecificproteinB,PSPB）等，其中PAG是研究和应用最为广泛的蛋白。根据Zoli等(1991)的报道，根据分子量大小，PAG可分为PAG1、PAG2、PAG3、PAG4等，而根据其建立的放射免疫测定方法，对配种后35天的奶牛妊娠确诊率达到93.03%，空怀率确认为97.90%，表明PAG完全可以作为牛妊娠诊断检测的标志物。随着技术的发展，以PAG为检测目标的检测方法越来越多，如美国IDEXXLaboratories公司生产的牛怀孕检测试剂盒，可用于检测牛血清或EDTA血浆中的怀孕早期相关蛋白的酶联免疫吸附试验（ELISA），其整体采用双抗体夹心法，操作繁琐，耗时超过2小时，在牧场现场检测时有极大缺陷，不便于使用；而美国BiotrackingLLC公司生产的BioPRYN同样是以ELISA为原理，操作与IDEXX产品类似。[0004]由于任何免疫学检测方法的关键都是特异性抗体。为了解决现有方法的缺陷，满足基层检测需求，有必要制备高灵敏度、稳定性好的抗体，尤其是来源广泛且成本低廉的单克隆抗体。发明内容[0005]本申请的目的在于提供一种高灵敏度、稳定性好的抗体，尤其是来源广泛且成本低廉的牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细胞株。[0006]本发明还要解决技术问题为提供上述牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细胞株的应用。[0007]本发明通过如下技术方案实现：一种牛妊娠相关糖蛋白PAG特异性单克隆抗体细