中药指纹图谱建立的原则与步骤.pdf

（一）建立指纹图谱的一般原则

中药指纹图谱的建立，应以系统的化学成分研究和药理学研究为

依托，体现系统性、特征性和稳定性三个基本原则。唯此，才能保证指

纹图谱的标准化、规范化、客观化，从而便于推广和应用。

1.系统性是指指纹图谱中反映的化学成分应包括该中药有效部位

所含大部分成分，或指标性成分的全部，如中药两头尖中抗肿瘤的有

效成分为皂苷类化合物，则其指纹图谱应尽可能地反映其中的皂苷类

成分；银杏叶的有效成分是黄酮类和银杏内酯类，则其指纹图谱可采

用两种方法，针对这两类成分分别分析，达到系统全面的目的。

2.特征性是指指纹图谱中反映的化学信息（如保留时间）应具有

较强的选择性，这些信息的综合结果，将能特征性地区分中药的真伪

与优劣，成为中药自身的化学条码”如北五味子的HPLC指纹图谱和

TLC指纹图谱，不仅包括多种的五味子木脂素类成分，而且具有许多

未知类成分，这些成分的峰位顺序、比值在一定范围内是固定的，并且

随药材品种不同而产生差异，依此可以很好地区别其来源、产地，判别

药材的真伪优劣。

3.稳定性是指所建立的指纹图谱在规定的方法、条件下的耐用程

度，即不同操作者、不同实验室所重复做出的指纹图谱应在所允许的

误差范围内，以体现其通用性和实用性。因而要求包括样品制备、分析

方法、实验过程、数据采集、处理、分析等全过程都要规范化操

1/7

作，同时，还应建立相应的评价机构，对其进行客观评价。

（二）建立指纹图谱的一般步骤

1.方案设计与思路

（1）研究对象的确定

在调研有关文献、新药申报资料（质量部分和工艺部分）及其它研

究结果的基础上，尽可能的详尽地了解药材、中间体及成品中所含成

分的种类及其理化性质，综合分析后找出成品中的药效成分或有效成

分，作为成品和中间体指纹图谱的研究对象，即分析检测目标。例如，

黄芪含黄酮、皂苷及多糖三类有效组分，黄芪多糖注射液及其中间体

的指纹图谱则以多糖为研究对象，黄芪原药材的指纹图谱应把黄酮、

皂苷及多糖作为研究对象。

复方注射剂应根据君臣佐使的原则，以君药、臣药中的有效成分作为

指纹图谱的研究对象，佐使药中的成分可采用其它指纹图谱方法进行

辅助、补充研究。

（2）研究方法的选择

研究方法应根据研究对象的物理化学性质来选择。大多数化合物可

采用HPLC。例如黄芪中黄酮、皂苷、多糖等。挥发性成分应采用GC。

例如鱼腥草中的鱼腥草素、土木香中的土木香内酯、异土木香内酯和

二氢土木香内酯等。某些有机酸经甲酯化后亦可用GC分析。采用上述

2/7

方法难以分离检测的成分，可考虑使用TLC和CE。

一个中药制剂的指纹图谱可以同时采用多种方法进行研究。选择

方法时，还需考虑药品检验系统复核时的设备、技术等因素。

(3)研究内容

根据国家食品药品监督管理局《中药注射剂指纹图谱研究的技术

要求》(暂行)的规定，主要研究内容有原药材、中间体、注射剂的指纹

图谱，涉及样品名称、来源、制备、测定方法、指纹图谱及技术参数等。

2.样品的收集

这是最初也是最关键的步骤。至少要收集10个批次样品。注意样

品的代表性。

(1)切不可将同一批次样品分散成数个批次，充当样品。

(2)原药材尽可能固定产地(GAP基地药材，地道药材)、采收期和

炮制方法。对光线稳定，疗效稳定，无临床不良反应的药材批次应重点

选择。

(3)中间体、注射剂样品的收集应重点选择工艺稳定、疗效稳定、

无不良反应的批次。

(4)留样应不少于实验用量的3倍。

3/7

3.供试品溶液的制备(样品的预处理)

（1）药材供试液的制备

根据所含成分的理化性质，通过溶剂提取、液液萃取、沉淀、吸附

等方法，分离富集样品。例如，黄芪中黄酮类成分通过碱的萃取、皂苷

类通过大孔吸附树脂吸附；苦参中总生物碱通过阳离子交换树脂分离；

挥发性样品常用水蒸气蒸馏法制备。

样品富集后，还需通过氧化铝预柱、C18预柱、硅胶预柱、聚酰胺

预柱等，除去色素等杂质，最后通过微孔滤膜，供HPLC测试。

（2）中间体供试液制备

可针对有效成分处理，并参照原药材的制备方法。

（3）注射剂供试液制备

液体注射剂一般无需特殊处理，可直接分析检测。

4.参照物的选择

一般选取样品中容易获得且含量较高的一个主要活性成分或指标

成分作为参照物（S）。参照物主要用于指纹图谱技术参数的确定，如

特征峰（共有峰）的相对保留时间，峰面积比值等。并有助于图谱的稳

定性、重现性的考查。例如三七药材的指纹图谱中以三七皂苷R1为参

照物。

4/7

由于指纹图谱比较复杂，内标物不易选择、插入，故一般不以内标

物做为参照物。

5.实