一种白藜芦醇丝素蛋白纳米粒的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105663051A(43)申请公布日2016.06.15(21)申请号201610078582.4C07C37/68(2006.01)(2016.01)(22)申请日2016.02.04A23L33/105C07K14/435(2006.01)常州可赛成功塑胶材料有限公司(71)申请人C07K1/14(2006.01)地址江苏省常州市新北区罗溪镇空港产业园旺财路10号(72)发明人高玉梅王志慧林大伟(51)Int.Cl.A61K9/16(2006.01)A61K31/05(2006.01)A61K47/42(2006.01)A61P39/06(2006.01)A61P7/02(2006.01)A61P31/10(2006.01)A61P35/00(2006.01)A61P3/06(2006.01)A61P1/16(2006.01)C07C39/21(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种白藜芦醇丝素蛋白纳米粒的制备方法(57)摘要本发明公开了一种白藜芦醇丝素蛋白纳米粒的制备方法，属于白藜芦醇领域。本发明从花生根须中提取得白藜芦醇浓缩液，对蚕丝脱胶得丝素蛋白，再通过透析得丝素蛋白溶液，将白藜芦醇浓缩液和丝素蛋白溶液分别装入双轴静电喷射装置的内外通道中，经内外通道注射，最后在喷头处混合，喷头处的溶液在静电场的作用下发生破裂形成微液滴，经冷冻干燥后即得白藜芦醇丝素蛋白纳米粒，本发明制得的白藜芦醇丝素蛋白纳米粒颗粒均匀，而且具有良好的水溶性，不易被氧化，而且整个制备过程中未使用有机溶剂，无有机溶剂残留，无毒无污染。CN105663051ACN105663051A权利要求书1/1页1.一种白藜芦醇丝素蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取1～2kg花生根须，放入超声清洗仪中清洗20～30min，将洗涤后的根须移入烘箱，在50～60℃下干燥10～12h，干燥结束后用气流粉碎机将根须粉碎并过100目标准筛，得到干燥花生根粉末；（2）称取500～600g上述得到的花生根粉末装入陶瓷酶解罐中，加入3～4L蒸馏水和花生根粉末总质量1～2%复合酶剂，用搅拌棒搅拌均匀后，再用浓度为0.5mol/L的醋酸溶液调节pH至5～6，放入恒温箱中在35～45℃下酶解2～3h，酶解后过滤，得酶解液，其中所述的复合酶剂为木聚糖酶和果胶酶按质量比为1:2复配制得；（3）量取400～500mL上述酶解液装入2L具塞三角瓶中，再加入300～400mL无水乙醇，放置在恒温水浴振荡器中，在75～85℃下振荡提取1～2h，提取结束后将提取液移入卧式离心机中，以4000～5000r/min转速离心15～20min，分离得上清液后，在40～45℃下旋蒸去除多余乙醇，即得白藜芦醇浓缩液，备用；（4）按蚕丝、蒸馏水和无水碳酸钠质量比为9:2:5称取总质量为700～800g混合物装入铁锅中，放置在电磁炉上，以1000～1200W功率加热煮制40～50min，去除蚕丝蛋白表面的丝胶蛋白，过滤后用去离子水冲洗滤渣，直至淋洗液澄清为止，将滤渣干燥，得丝素蛋白；（5）称取50～60g丝素蛋白倒入1L烧杯中，加入10～15g无水氯化钙、700～800mL去离子水和200～300mL无水乙醇，用保鲜膜密封烧杯口，放置在摇床上，在60～70℃下振荡溶解30～40min，待溶液冷却至室温后将溶液装入透析袋中，以流动蒸馏水作为透析液透析1～2天后，收集透析袋中的溶液即为纯净的丝素蛋白溶液；（6）将等体积的丝素蛋白溶液和备用的白藜芦醇浓缩液分别装入双轴静电喷射装置的内外通道中，在室温和45～55%相对湿度条件下，经内外通道注射，最后在喷头处混合，喷头处的溶液在静电场的作用下发生破裂形成微液滴，经冷冻干燥后即得白藜芦醇丝素蛋白纳米粒。2CN105663051A说明书1/4页一种白藜芦醇丝素蛋白纳米粒的制备方法技术领域[0001]本发明公开了一种白藜芦醇丝素蛋白纳米粒的制备方法，属于白藜芦醇领域。背景技术[0002]白藜芦醇是一种活性多酚物质，在虎杖、葡萄、花生、毛脉酸模等植物中存在。白藜芦醇具有广泛的生理药理活性，如抗氧化、抑制血小板聚集、抗真菌、抗肿瘤、降低血清和肝脏的脂质，保护肝脏等作用。但其对光敏感，易氧化，水溶性差，生物利用度低，影响其在医药领域的广泛应用。[0003]白藜芦醇纳米脂质体制备过程中存在有机试剂残留和磷脂成分易氧化等问题，且现有实验室制备方法生产成本高、周期长，制备过程难以控制，放大为工业化生产存在难度；储存过程中易受到温度、pH等外界环境的影响发生泄露，稳定性有待进一步提高；白藜芦醇纳米脂质体进入体内与特定受体相结合的作用机理尚不明确，其安全性与毒性仍存在争议；其