食品中维生素B1的测定(食品安全国家标准).pdf

食品安全国家标准
食品中维生素的测定
B1

1范围

本标准规定了高效液相色谱法、荧光光度法测定食品中维生素的方法。
B1
本标准适用于食品中维生素含量的测定。
B1

第一法高效液相色谱法

2原理

样品在稀盐酸介质中恒温酸水解、中和，再酶解，水解液用碱性铁氰化钾溶液衍生，正丁醇萃取后，
经反相色谱柱分离，用高效液相色谱－荧光检测器检测，外标法定量。
C18

3试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
3.1试剂
3.1.1正丁醇。
(CH3CH2CH2CH2OH)
3.1.2铁氰化钾)。
(K3Fe(CN)6
3.1.3氢氧化钠(NaOH)。
3.1.4盐酸(HCl)。
3.1.5乙酸钠。
(CH3COONa·3H2O)
3.1.6冰乙酸。
(CH3COOH)
3.1.7甲醇：色谱纯。
(CH3OH)
3.1.8五氧化二磷（）或者氯化钙（）。
P2O5CaCl2
3.1.9木瓜蛋白酶：应不含维生素，活力单位≥。
B1800U/mg
3.1.10淀粉酶：应不含维生素，活力单位≥。
B13700U/mg
3.2试剂配制

3.2.1铁氰化钾溶液（20g/L）：称取2g铁氰化钾，用水溶解并定容至100mL，摇匀。临用前配制。
3.2.2氢氧化钠溶液（100g/L）：称取25g氢氧化钠，用水溶解并定容至250mL，摇匀。
3.2.3碱性铁氰化钾溶液：将5mL铁氰化钾溶液与200mL氢氧化钠溶液混合，摇匀。临用前配制。
3.2.4盐酸溶液（0.1mol/L）：移取8.5mL盐酸，加水稀释至1000mL，摇匀。
3.2.5盐酸溶液（0.01mol/L）：移取0.1mol/L盐酸溶液50mL，用水稀释并定容至500mL，摇匀。
3.2.6乙酸钠溶液（0.05mol/L）：称取6.80g乙酸钠，加900mL水溶解，用冰乙酸调pH值为4.0～
5.0之间，定容至1000mL。经0.45μm微孔滤膜过滤后使用。
3.2.7乙酸钠溶液（2.0mol/L）：称取27.2g乙酸钠，用水溶解并定容至100mL，摇匀。
3.2.8混合酶溶液：称取2.0mg木瓜蛋白酶（活力单位≥800U/mg）、3.0mg淀粉酶（活力单位≥3700
U/mg），加水定容至50mL，涡旋，使呈混悬状液体，冷藏保存。临用前再次摇匀后使用。

1
3.3标准品

维生素B标准品：盐酸硫胺素(CHCNOS·HCl))，CAS:67-03-8，纯度≥99.0%。
11217l4
3.4标准溶液配制
3.4.1维生素标准储备液（）：准确称取相当于（精确至）硫胺素、经五氧化
B1500μg/mL50mg0.1mg
二磷或者氯化钙干燥24小时的盐酸硫胺素标准品，用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至100mL，摇匀。
置于0℃～4℃冰箱中，保存期为3个月。
3.4.2维生素标准中间液(10.0：准确移取标准储备液，用水稀释并定容至，
B1μg/mL)2.00mL100mL
摇匀。临用前配制。
3.4.3维生素标准系列工作液：吸取维生素标准中间液0μ、20.0μ、100μ、200μ、400μ，
B1B1LLLLL
800μ，1000μ，用水定容至，标准系列工作液中维生素的浓度分别为，0.0200，
LL10mLB10μg/mLμg/mL
0.100μg/mL，0.200μg/mL，0.400μg/mL，0.800μg/mL，1.00μg/mL。临用时配制。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱仪，配置荧光检测器。
4.2分析天平：感量为0.01g和0.1mg。
4.3离心机：转速≥4000r/min。
4.4pH计：精度0.01。
4.5组织捣碎机（最大转速不低于12000r/min）。
4.6电热恒温干燥箱或高压灭菌锅。

5分析步骤

5.1试样的制备
5.1.1液体或固体粉末样品：将样品混合均匀后，立即测定或于冰箱中冷藏。
5.1.2新鲜水果、蔬菜和肉类：取100g左右样品，用匀浆机或者粉碎机将样品均质后，制得均匀性
一致的匀浆，立即测定或者于冰箱中冷冻保存。
5.1.3其他含水量较低的固体样品：适用含水量在15%左右的粮食谷物；取100g左右样品，用粉碎
机将样品粉碎后后，制得均匀性一致的粉末，立即测定或者于冰箱中冷藏保存。
5.2试样溶液的制备
5.2.1试液提取
称取3g~5g（精确至0.01g）固体试样或者10g~20g液体试样于100mL三角瓶中(带有软质塞子)，
加30mL0.1mol/L盐酸溶液，充分摇匀，塞上软质塞子，放入电热恒温干燥箱中于120℃保持30min，
或者在高压灭菌锅中121℃保持30min。水解结束待冷却至40℃以下取出，轻摇数次；用pH计指示，用
2.0mol/L乙酸钠溶液调节pH值至4