血型基因检测对照品的制备及其在三种稀有血型筛选中的.pdf

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血型基因检测对照品的制备及其在三种稀有血型筛选中的应用·论著·polymorphism，SNP)位点构建了含有突变SNP位点(G冲B基因cDNA王攀叶璐夷郭忠慧目前国际输血协会(InternationalTransfusion，ISBT)正式命名的人类红细胞血型系统有30个，包括近300个血型抗原。除ABO、Rh血型外，还存在一些稀有血型，这蝗血型在人群中的比例非常低，在临床输血过程中即使供、受血者的ABO、Rh血型都相同，也有可能因为稀有血型不合引起同种免朱自严况。方法采用基于PCR的基因定点诱变技术对S和Ok8血型等位基因的单核苷酸多态性(single153位C／T突变和抗原FF、S和Ok3等位基因的SNP位点设计序列特异性(sequenceprimer，SSP)引物，构建多重PCR体系．对438份随机献血者样本进行FF、S和Ok8血型抗原的基因筛选。结果成功应用定点诱变PCR体系，438份随机献血者样本中共检出2例Fy(a一)样本。未检出S一和()k(a一)样本。结论本实验建立的多重PCR体系是一种有效的进行Fy"、S和Ok。血型基因检测的方法。定点诱变；polymorphism中华医学遗传学杂志2010年12月第27卷第6期Chin2010，V01．27，No．!【摘要】目的应用基于聚合酶链反应(polymerasereaction，PCR)的基冈定点诱变技术(site-mutagenesis，SDM)制备S、Ok。血型等位基因检测对照品。用多重聚合酶链反应(multiplex技术建立3种血型F旷、S和Ok。的基冈分型方法，以厂解这3种血型在中国随机献血者中的多态性分布状BSG基因cDNA274位G／A突变)的标准质粒，作为S和Ok8血型等位基因检测的对照品。同时针对血型技术完成了S和Ok8基因检测中等位基凶对照晶的制备．并建立了可同时检测Fya、S和Ok8血型的多重基于PCR的基因定点诱变技术能够得到难以获得的血型基因检测等位基因对照品，用于验证基因分型方法。【关键词】多重聚合酶链反应；等位基因；单核苷酸多态性groups‘WA～GZhong—hui，ZHUReferrenceofTransfusion，Shanghai，20005author：ZHUZi—yan，Email：[e-mail][Abstract]ObjectiveFF。sdonors．Methodsmutagenesis(SDM)techniqueC／TG／ASDMthreeF圹，sSI)MFyI，S[Keywords]Center[1名(21)]基金项目：上海市血液中心科研基金[LS(21)]作者单位：200051上海市血液中心I：海市输血研究所血型参比研究室(￡攀现为J：海市血液中心与华东师范大学联合培养的硕士研究生)通信作者：朱自严．Entail：[e-mail]．∞societyBloodJMedchaindirectedPCR)nucleotidespecificestablishmentcontrolsforgroupandtheapplicationPan，YELu—j，i，GUoZi—yan．(BloodGroupLaboratory．ShanghaiCenter。ShanghaiInstitutelP．尺．C，lina)CorrespondingToestablishalleledetectionbloodOk。．AmuhiplexPCRmethodantigensOk‘wasdevelopedusedinvestigatedistributiontheseinChineserandomPolymerasereaction(PCR)一based。genesite-directedweremakemutagenesissinglepolymorphism(SNP)sitesalleles(the153pointmutationGYPBgene，and274BSGgene)asdetection．SequenceprimersdesignedaccordingSNPsitesFy"．SOk‘．Amultiplexsystemwas438donorsamplesscreenedFy^，Sand()kI．ResultsTheOk‘weresuccessfullymadewithtechnique，aanalyzeOk。．TwoFy(a--)detectedsamples，no8--and()k(a--)samplefound．ConclusionPCR—basedtechniquebeobtainunavailablegenotyping．TheP【：Restablishedthisstud