一种水貂伪狂犬灭活疫苗及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106085968A(43)申请公布日2016.11.09(21)申请号201610532700.4A61P31/22(2006.01)(22)申请日2016.07.07(83)生物保藏信息CGMCCNo.123402016.05.31(71)申请人中国农业科学院特产研究所地址130112吉林省长春市净月经济开发区聚业大街4899号(72)发明人闫喜军刘昊李欣彤胡博鲁荣光(74)专利代理机构北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司11139代理人孙皓晨马鑫(51)Int.Cl.C12N7/00(2006.01)A61K39/245(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种水貂伪狂犬灭活疫苗及其制备方法和用途(57)摘要本发明公开了一种水貂伪狂犬灭活疫苗及其制备方法和用途。本发明的一种水貂伪狂犬灭活疫苗中含有的灭活后的保藏号为CGMCCNo.12340的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株，本发明还公开了所述水貂伪狂犬疫苗的制备方法。实验证明本发明制备的水貂伪狂犬灭活疫苗具有良好的安全性，免疫水貂后可并产生理想的免疫保护效果，因此可作为防控水貂等鼬科动物伪狂犬的候选疫苗株。CN106085968ACN106085968A权利要求书1/1页1.一种伪狂犬病毒株，其特征在于，所述的伪狂犬病毒株命名为PRV-DL14/08，其保藏号为CGMCCNo.12340，保藏日期为2016年5月31日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。2.权利要求1所述的伪狂犬病毒株在制备防治伪狂犬疫苗中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的伪狂犬疫苗为水貂伪狂犬灭活疫苗。4.一种水貂伪狂犬灭活疫苗，其特征在于，含有灭活后的权利要求1所述的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株。5.根据权利要求4所述的水貂伪狂犬灭活疫苗，其特征在于，所述伪狂犬灭活疫苗中含6有的灭活后的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株≥10TCID50/头份。6.一种制备权利要求4或5所述的水貂伪狂犬灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株增殖后进行病毒滴度测定，依所含免疫剂量，加入灭活剂及佐剂后制备而成，所述伪狂犬疫苗中含有伪狂犬病毒株PRV-DL14/086株≥10TCID50/头份。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株的增殖包括以下步骤：在已长成单层PK15细胞中，按体积百分比1％的比例接种伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株，置于37℃，5％CO2培养箱中，培养72h，反复冻融3次后收获，至-80℃保存，应不超过1年。8.根据权利要求6所述的方法，其特种在于，所述的灭活剂为甲醛溶液，所述的佐剂为铝胶。9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：在已长成单层PK15细胞中，按体积百分比1％的比例接种伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株，置于37℃，5％CO2培养箱中，培养72h，反复冻融3次后收获病毒上清液14/08，按2份体积的病毒上清液加5份体积的pH7.2-7.42％(w/w)氢氧化铝磷酸盐缓冲液的比例加入氢氧化铝磷酸盐缓冲液，然后用20％(w/w)氢氧化钠将pH值调至7.2-7.4，按总体积的0.15％加入甲醛溶液，振摇30分钟，然后放2-8℃灭活7日，期间每日上、下午各振摇1次，每次15-20分钟，加入25％(w/w)铝胶，每隔12小时震动30min，制备得到所述的水貂伪狂犬灭活疫苗。2CN106085968A说明书1/6页一种水貂伪狂犬灭活疫苗及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明涉及一种伪狂犬灭活疫苗及其制备方法和用途，特别涉及一种由伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株制备的用于水貂伪狂犬防控的灭活疫苗及制备方法，本发明属于生物技术领域。背景技术[0002]伪狂犬病(Pseudorabies,PR)，是由伪狂犬病毒(PseudorabiesVirus，PRV)引起的经济动物和家畜的一种急性传染病。其特征是发热、奇痒、内脏出血、脑脊髓炎等。猪的伪狂犬已有报道，近年来水貂临床病例也持续增加。该病早在1813年流行于美国的牛群中，1902年匈牙利学者奥叶兹基(Aujeszky)第一次较为详细的描述了该病，故命名为奥叶兹基病(又称Aujeszky氏病，Aujeszky’sdisease,AD),1910年，Schmiedhofer通过过滤试验证实本病原为病毒且首先分离出病毒。[0003]刘永纯1984年报道了第一例猫感染伪狂犬以后，1956年周圣文又首次报道了哺乳仔猪感染伪狂犬的病例。伪狂犬在我国一直未得到彻底净化，而