一种水貂链球菌蜂胶灭活疫苗及制备工艺.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102626513A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102626513A(43)申请公布日2012.08.08(21)申请号201210130888.1(22)申请日2012.05.01(71)申请人青岛农业大学地址266109山东省青岛市城阳区青岛农业大学动物科技学院生物楼C201(72)发明人单虎张传美秦晓冰秦志华杨瑞梅(51)Int.Cl.A61K39/09(2006.01)A61K39/39(2006.01)A61P31/04(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书33页页(54)发明名称一种水貂链球菌蜂胶灭活疫苗及制备工艺(57)摘要本发明公开了一种由两种链球菌菌株制备的水貂链球菌蜂胶灭活疫苗。将所述链球菌菌株接种培养基通气扩增培养，收获培养物灭活后按1∶1比例混合，加蜂胶制备水貂蜂胶链球菌二价灭活疫苗。本发明所述链球菌蜂胶灭活疫苗用于预防水貂出血性肺炎免疫效果好，可获得至少五个月的保护期，保护率在80％以上，具有良好的应用前景。CN102653ACN102626513A权利要求书1/1页1.一种水貂链球菌蜂胶疫苗，其特征在于主剂为购自中国兽医药品监察所菌种室的链球菌2型SQN1株和SQN2株，佐剂为蜂胶。2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于疫苗浓度为含菌量200亿CFU/ml，含蜂胶干物质10~15mg/ml。3.权利要求1所述的水貂链球菌蜂胶疫苗的制备工艺，其特征在于所述的制备工艺包括如下步骤：1）制备菌液；2）制备蜂胶液；3）配置疫苗，取菌液保存液与蜂胶保存液混合成黄色混悬液，分装后密封保存。4.根据权利要求3所述的制备工艺，其特征在于制备菌液步骤主要由下述步骤完成：将链球菌2型SQN1株和SQN2株加入到培养基中，37℃培养16-18小时，调整到菌液浓度为20亿~25亿活菌/ml，再加入甲醛溶液使最终浓度为0.5%，放在37℃中灭活24小时制成灭活菌苗备用。5.根据权利要求3所述的制备工艺，其特征在于制备蜂胶液步骤主要由以下步骤完成：选取已知纯度的蜂胶，经破碎后过筛，溶于95%的乙醇溶液，再根据要求配成适当浓度的溶液于4℃下保存备用。6.根据权利要求3所述的制备工艺，其特征在于黄褐色混悬液，密封保存于4-8℃中。7.权利要求1所述的水貂链球菌蜂胶疫苗的用途，主要是用于水貂链球菌的免疫。2CN102626513A说明书1/3页一种水貂链球菌蜂胶灭活疫苗及制备工艺技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种疫苗及其制备方法。背景技术[0002]水貂链球菌病是由病原性链球菌引起的一种传染病。在临床上患貂常表现为脓肿型，在头部和颈部发生脓肿。也有的呈现肺炎、肋膜炎、腹膜炎、子宫内膜炎、乳房炎，最后导致败血症。链球菌引起脑膜炎时，常出现一系列的神经症状，行走摇摆，共济失调，有的突然倒地，呈现强直性痉挛，头向后仰，四肢伸展，肌肉紧张。本病潜伏期6-16天。病程短的3小时，长的可达36小时。本病多为散发，很少呈地方流行。[0003]链球菌(Streptococcus)是化脓性球菌的一类常见的细菌，属于芽孢杆菌纲，乳杆菌目，链球菌科。水貂链球菌为革兰氏阳性球菌,成对或单个存在,也有呈短链形式存在的,最多的可达到12~14个链状排列,但普遍的排列链较短并且在鲜血平皿上溶血性差,糖发酵反应基本符合链球菌的生化特性。[0004]目前，我国对水貂链球病主要采用是抗生素药物治疗。但本病在临床上通过单独投喂或肌注兽药都难以达到良好的治疗效果。而且药物治疗存在一定的缺陷，兽药治疗仅能够减少死亡,使疾病病程延长,一旦停药容易复发，最终由于细菌获得的耐药性及长期投药对动物的伤害,而致动物发病死亡,达不到良好的控制效果。本病只有通过蜂胶疫苗预防或紧急预防和使用敏感抗生素相结合的办法,才能达到良好的预防和治疗效果。因此防治该病发生的有效措施是研制相应的蜂胶灭活疫苗。发明内容[0005]本发明的目的在于提供一种以蜂胶为佐剂的水貂链球菌蜂胶灭活疫苗的制备方法，使其免疫水貂后副作用小，对毛皮质量影响小，免疫产生时间早，免疫力强，免疫期长。[0006]具体实施步骤：步骤1：将链球菌2型SQN1株和SQN2株分别接种于发酵培养基培养，调整菌数为200-250亿CFU/mL按比例1：1混合；步骤2：灭活步骤1所得混合培养物；步骤3：在步骤2所得培养物中添加蜂胶佐剂，即得所述水貂链球菌蜂胶灭活疫苗。[0007]作为优选，步骤1所述接种为按发酵培养基体积的2%接种菌株。[0008]作为优选，步骤1所述培养为在37℃通气搅拌培养12-16h，控制链球菌的培养时间在16h以内，防止培养时间过长导致链球菌外毒素的产生，更好地保障疫苗安全性。[0009]作为优选，步骤2所述灭活为用终