一种检验猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗效力的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115480064A(43)申请公布日2022.12.16(21)申请号202211053317.2G01N33/569(2006.01)(22)申请日2022.08.31A61K49/00(2006.01)(71)申请人金宇保灵生物药品有限公司地址010100内蒙古自治区呼和浩特市经济技术开发区沙尔沁工业园区金宇大街1号(72)发明人李超陈坚李晓艳王岩闫聪杨波齐志涛吉格木德宋志刚俎红丽宋庆庆赵丽霞张建宏王华(74)专利代理机构北京尚诚知识产权代理有限公司11322专利代理师叶占洋鲁兵(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书13页附图1页(54)发明名称一种检验猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗效力的方法(57)摘要本发明公开了一种检验猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗效力的方法，属于疫苗研发技术领域。本发明提供的检验猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗效力的方法包括利用健康家兔替代本动物猪进行二次免疫，并以免后家兔血清中的猪伪狂犬病毒中和抗体水平评价猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗的效力。本发明提供的方法可以有效降低猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗开发的成本，并且可以解决目前猪伪狂犬病毒阴性猪筛选非常困难的问题。CN115480064ACN115480064A权利要求书1/1页1.一种检验猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗效力的方法，其包括使用猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗对健康家兔进行免疫，并于免后测定家兔血清中猪伪狂犬病毒中和抗体的水平，以该中和抗体的水平评价猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗的效力。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述免疫的程序为二次免疫，在一免后21d以与一免相同的剂量进行二次免疫；可选地，所述免疫的剂量为0.25ml以上。3.根据权利要求1‑2中任一项所述的方法，其中所述免疫的途径为家兔腿部肌肉内注射。4.根据权利要求1‑3中任一项所述的方法，其中所述于免后测定家兔血清中猪伪狂犬病毒中和抗体的水平包括于二免后7d测定家兔血清中猪伪狂犬病毒中和抗体的水平；可选地，当所述中和抗体的水平≥1:16时，则所述猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗的免疫效力合格，能够对猪实现80％以上的保护率。5.根据权利要求1‑4中任一项所述的方法，其中所述健康家兔的血清中猪伪狂犬病毒中和抗体的水平＜1:2。6.根据权利要求1‑5中任一项所述的方法，其中所述猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗包含猪伪狂犬gE基因缺失毒株灭活抗原和疫苗佐剂；其中所述疫苗佐剂包括：75wt％‑85wt％的注射用油、1wt％‑5wt％的精制司本‑80、和10wt％‑24wt％的精制吐温‑80；其中精制是指用H2O2对司本‑80或吐温‑80进行处理至其颜色由深至浅不再变化时，去除产物中未反应的H2O2后再进行过滤。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述猪伪狂犬gE基因缺失毒株灭活抗原的含量以7.00灭活前病毒含量计为10TCID50/0.1ml以上。8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述猪伪狂犬gE基因缺失毒株灭活抗原与所述疫苗佐剂的质量比为(1‑4):1，可选为(1‑2):1，进一步可选为1:1。9.根据权利要求6‑8中任一项所述的方法，其中所述注射用油包括注射用矿物油、注射用植物油、或其组合；可选地，所述注射用矿物油包括白油；进一步可选地，所述白油包括Marcol‑52白油、Primol352白油、Total130#白油、Total150#白油、Total170#白油、Drakeol‑5白油、Drakeol‑7白油和Sonneborn4#白油、Sonneborn10#白油PARACOSKF40、PARACOSKF50、角鲨烯、角鲨烷。10.根据权利要求6‑9中任一项所述的方法，所述猪伪狂犬gE基因缺失毒株为JS‑2012ΔgE毒株。2CN115480064A说明书1/13页一种检验猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗效力的方法技术领域[0001]本发明属于疫苗研发技术领域，具体涉及一种检验猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗效力的方法，具体涉及一种利用家兔检验猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗效力的方法。背景技术[0002]伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的多种家畜和野生动物的急性传染病。PRV属疱疹病毒科、疱疹病毒亚科，水痘病毒属，具有神经嗜性但对温度、pH值均有较强抵抗力，但对消毒剂较为敏感。PRV可感染除人和无尾猿以外的哺乳动物，猪是该病的主要宿主和传染来源，对猪可呈爆发性流行，引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪的大量死亡，育肥猪呼吸困难、增长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。[0003]接种有效的疫苗可有效预防并控制该病的传播。目前，在猪伪狂犬疫苗的效力