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Westernblot实验技术定义:WesternBlot基本原理WesternBlot一般流程通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白水溶液提取法针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂。细胞裂解液:50mmol/LTris-HCl,150mmol/LNacl,5mmol/LEDTA,1%NP40,0.05%PMSF,2μg/mLAprotinin,0.5μg/mLLeupeptin,pH8.0有机溶剂提取法对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取,包括乙醇、丙酮和丁醇等。通过层析或电洗脱法制备目的蛋白蛋白样品的定量SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺SDS配胶的Tris缓冲液TEMED过硫酸铵(时间)Tris-甘氨酸电泳缓冲液凝胶浓度与蛋白分离范围儡趣钨哦奢樊维罗圆抒查谊贫娠天稳灶延挽塔蹲予忘畏刻闸劳州物醚帚酿Westernblot实验技术-1Westernblot实验技术-1转膜转膜转膜后检测封闭一抗、二抗孵育二抗与底物反应显色WesternBlot常见问题分析SDS-PAGE电泳条带比正常的窄?“微笑”或“倒微笑”条带?转膜及抗体检测背景太高