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Westernblot实验步骤.pptx

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Westernblot实验技术Westernblot原理WesternBlot信号放大基本原理WesternBlot一般流程贴壁细胞：细胞可以在培养皿里裂解，洗掉培养基，PBS洗2~3次，加入RIPA裂解液裂解，以可以将细胞消化下来，离心，PBS洗2~3次，加入RIPA冰上裂解液裂解30分钟（可提高蛋白浓度）。按6孔板100-200微升/孔的比例加入PIPA(可根据细胞多少调节裂解液体积）,4度，12000转，离心15分钟，收集上清.悬浮细胞:收集培养细胞，离心去除培养液，用PBS洗2-3遍，按6孔板加入100-200微升/孔的比例加入RIPA，用抢悬浮细胞。如果细胞数量较大，应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加RIPA的用量，裂解完全时应无明显的细胞颗粒。4度，12000转，离心15分钟，收集上清.组织样品：液氮研磨组织，按每20毫克组织加100-200微升的比例加入RIPA,冰上裂解30分钟，4度，12000转，离心30分钟，收集上清.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳转膜封闭显影WesternBlot基本实验步骤蛋白样品的定量SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳转膜一抗、二抗孵育THANKS!