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印迹技术（blotting）印迹技术分类一、定义WesternBlot基本原理WesternBlot一般流程三、过程原理：在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反应BiuretReaction）蛋白质-铜复合物使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成钼蓝-钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。（还原反应）123456sample1sample2sample3根据标准品绘制标准曲线3、SDS－PAGE浓缩原理：+5×电泳缓冲液聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（单丙）和甲叉双丙烯酰胺（双丙）聚合而成聚合过程需要催化剂。聚丙烯酰胺凝胶电泳丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺SDS配胶的Tris缓冲液TEMED过硫酸铵(时间)Tris-甘氨酸电泳缓冲液CH2=CH凝胶的物理性质如机械强度、弹性、透明度和粘着度都取决于凝胶总浓度（T）和Acr与Bis两者之比。凝胶孔径大小，主要受凝胶浓度的影响。凝胶浓度越大，孔径越小。凝胶浓度过大，胶硬而脆，易折断。浓度过小，凝胶稀软，不易操作，也易断裂。用于研究大分子核酸的凝胶多为2.4%的大孔凝胶，此时凝胶太软，不易操作，可加入0.5%琼脂糖，或在3%凝胶中加入20%蔗糖以增加机械强度而又不影响凝胶孔径大小。不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶浓度与蛋白分离范围4、转膜转膜方法Western装置蛋白质电泳的分子量标准转膜后检测凝胶中的蛋白质染色：直接染色电泳结果5、封闭6、一抗、二抗孵育7、显色1）先用一抗（待测蛋白的单克隆抗体）与膜上的蛋白结合。Blotting④结果发光鉴定原理思考题电泳的基本概念，SDS-PAGE的原理什么是印迹技术和探针Westernblot的原理和主要步骤谢谢大家