一种嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111057668A(43)申请公布日2020.04.24(21)申请号201911371396.X(22)申请日2019.12.26(71)申请人上海源耀农业股份有限公司地址201317上海市浦东新区航鹤路2268号2幢(72)发明人高小创朱校适季春源(74)专利代理机构上海申新律师事务所31272代理人郎祺(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12R1/23(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法(57)摘要本发明提供了嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法，经过一级种子培养、二级种子扩培、高密度发酵培养和后发酵的培养方法得到含有高浓度活菌及代谢产物的嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂。该制备方法对培养基和发酵条件进行了优化、补料工艺及大规模发酵工艺参数优化，大大提高了产品性能与生产效率，代谢产物富含量显著高于现有发酵水平。该制备过程无需菌体浓缩、保护剂或载体混合、冷冻干燥、粉碎等过程，其生产工艺相对简单，过程成本低，适合大规模工业化生产。此外，本发明提供的嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂通过添加至饮水与饲料中应用于家禽养殖，在家禽饮水中投放极为方便、不会产生堵塞饮水管道的问题，具有较大的应用前景与市场空间。CN111057668ACN111057668A权利要求书1/1页1.一种嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，一级种子培养：将嗜酸乳杆菌接种在一级种子培养基上，在37℃、转速50-100rpm的条件下培养10-12h得到一级种子液；步骤二，将步骤一获得的所述一级种子液接种到二级种子培养基中，接种量为1-2％，在37℃、转速100-150rpm的条件下培养6-8h得到二级种子液；步骤三，发酵培养基的制备与灭菌：(1)原料粉筛：将玉米和豆粕粉碎，过筛；(2)上罐：称取所需发酵培养基原料组分，与少量水混合后加入发酵罐中，继续加水至所需刻度，300-400rpm下搅拌混匀20-30min制备发酵培养基；(3)对所述发酵培养基进行实消灭菌；步骤四，混合接种培养：(1)混合接种：将步骤二得到的所述二级种子液按照1.2-2.2％的接种量接种到步骤三灭菌后的所述发酵培养基中，在33-35℃、转速为300-400rpm的条件下混合20-30min；(2)发酵培养：混合之后，在33-35℃、转速150-200rpm的条件下培养时间8-10h；步骤五，补料及后发酵：发酵培养后，以20L/h的速度补充5-10％发酵液体积的营养培养基，在33-35℃、转速150-200rpm的条件下，培养时间2-4h；步骤六，分装打包：下罐、收集菌液，分装、打包，即得液体发酵菌剂。2.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法，其特征在于，所述一级种子培养基的组成成分及其浓度为：葡萄糖15-20g/L，胰蛋白胨8-10g/L，酵母浸膏8-10g/L，磷酸二氢钾1-2g/L，硫酸镁0.3-0.58g/L，硫酸锰0.15-0.25g/L，乙酸钠3-5g/L，柠檬酸二胺1.5-2g/L。3.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法，其特征在于，步骤一中所述嗜酸乳杆菌在所述一级种子培养基上的接种量为1-2％。4.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法，其特征在于，所述二级种子培养基的组成成分及其浓度为：葡萄糖15-20g/L，胰蛋白胨8-10g/L，酵母浸膏8-10g/L，磷酸二氢钾1-2g/L，硫酸镁0.3-0.58g/L，硫酸锰0.15-0.25g/L，乙酸钠3-5g/L，柠檬酸二胺1.5-2g/L。5.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法，其特征在于，步骤三中所述玉米和豆粕的粒径为60-80目。6.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法，其特征在于，步骤三中所述实消灭菌的过程中设置的参数为：温度115-121℃，灭菌时间25-35min，压力控制0.08-0.15Mpa。7.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基的组成成分及其浓度为：葡萄糖10-20g/L，玉米粉3-5g/L，豆粕粉15-20g/L，牛肉浸粉5-8g/L，磷酸二氢钾1-2g/L，硫酸镁0.3-0.58g/L，硫酸锰0.15-0.25g/L，乙酸钠3-5g/L，柠檬酸二胺1.5-2g/L。8.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌的液体发酵菌剂的制备方法，其特征在于，所述营养培养基的组成成分及其浓度为：葡萄糖5-10g/L，胰蛋白胨2-5g/L，牛肉浸粉3-5g/L。9.一种如权利要求1-8任意一项所述的制备方法制备