一种利用盐析法检测真蛋白含量的测定方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112924448A(43)申请公布日2021.06.08(21)申请号202110128296.5(22)申请日2021.01.29(71)申请人青岛农业大学地址266109山东省青岛市城阳区长城路700号(72)发明人张玉娜王倩文黄小丽孙潇(74)专利代理机构北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙)11531代理人盛君梅(51)Int.Cl.G01N21/82(2006.01)G01N21/83(2006.01)G01N1/28(2006.01)权利要求书1页说明书7页(54)发明名称一种利用盐析法检测真蛋白含量的测定方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种通过盐析法检测真蛋白含量的测定方法，包括：1)称取样品置于容器中，加适量水，加热至沸腾后转为80℃水浴30min；2)从水浴中取出后即刻缓慢加入氢氧化钠，再加入硫酸铜，静置陈化得试液；3)将静置后的试液过滤，洗涤沉淀物数次；4)将沉淀物和滤纸充分干燥后，放入定氮消管内先加入15mL硫酸，静置，缓慢加热预消解后取下冷却，然后再次加入硫酸、无水硫酸钠、硫酸铜加热到420℃消解至澄清，获得待测试样；5)将上述待测试样用凯氏定氮法进行氮的测定，即得出样品中真蛋白含量。本发明确定了利用盐析法检测饲料或乳制品中真蛋白含量结果更加准确，提升了测定结果的重复性、稳定性。CN112924448ACN112924448A权利要求书1/1页1.一种通过盐析法检测真蛋白含量的测定方法，其特征在于，包括：1)准确称取样品0.5‑1g置于容器中，加适量水，加热至沸后，放入80℃的水浴锅中水浴30min；2)从水浴锅中取出后即刻缓慢加入氢氧化钠溶液，再加入硫酸铜溶液，边加边搅拌，静置陈化2h，得试液；所述氢氧化钠溶液浓度为1.25％；所述硫酸铜溶液浓度为6％；所述氢氧化钠溶液与硫酸铜溶液的体积比为1：1；优选地，添加量分别为15‑20mL；3)将静置后的所述试液以双层定性滤纸过滤，以热水洗涤沉淀数次；4)将过滤洗涤后的沉淀物和滤纸一起充分干燥后，放入定氮消管内先加入15mL硫酸，静置后缓慢加热至100℃左右，进行预消解；取下冷却后再次加入硫酸、无水硫酸钠、硫酸铜加热到420℃消解至溶液澄清，获得待测试样5)将上述待测试样以凯氏定氮法进行氮的测定，即得到样品中真蛋白含量。2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤1)中样品量为0.5000‑1.0000g。3.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤1)中以g:mL计，样品质量与水的加入量的比例为1：100‑25。4.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤1)中加热至沸后，于80℃的水浴锅中水浴30分钟。5.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤2)中先缓慢加入1.25％氢氧化钠20mL，再加入6％硫酸铜溶液20mL，边加边搅拌，静置陈化2‑4h。6.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤3)中以80‑90℃的热水洗涤沉淀6至7次。7.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤3)中洗涤沉淀直至以5％氯化钡溶液数滴检查滤液时不生成白色硫酸钡沉淀。8.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤4)中的消化步骤是通过包括下述步骤的方法实现的：先加入15mL浓硫酸，静置1小时，然后慢慢升温至100℃左右，进行预消解，1小时后取下冷却，再加无水硫酸钠3g，无水硫酸铜0.3g，浓硫酸5mL，置于消解炉上继续升温到420℃消解至溶液澄清。9.如权利要求1‑8中任一项所述的测定方法，其特征在于，所述样品为饲料或乳制品。10.如权利要求1‑9所述的利用盐析法检测真蛋白的测定方法在检测饲料或乳制品中的应用。2CN112924448A说明书1/7页一种利用盐析法检测真蛋白含量的测定方法及其应用技术领域[0001]本发明属于分析检测领域，涉及一种改进的盐析法测定饲料或乳制品中真蛋白含量的测定地及其应用。背景技术[0002]蛋白质的含量是评价饲料、乳制品营养价值的主要指标之一，是饲料、乳制品质量的关键控制因素，目前评判蛋白质含量高低一般采用粗蛋白来表示，粗蛋白通常是采用国家标准方法凯氏定氮法通过测定饲料、乳制品中的总氮含量计算而得到的蛋白质含量，而总氮含量包括了蛋白态的氮和非蛋白态的氮，真蛋白就是根据蛋白态的氮计算所得到的蛋白质的含量。中国标准出版社于2001出版的“中国农业标准汇编饲料卷”中也提到了测定饲料中粗蛋白的标准方法，但是国家标准中的粗蛋白实质上包括了真蛋白质和非蛋白类物质，与真实蛋白质含量有一定偏差，而只有真蛋白含量的高低才能客观反映饲料、乳制品营养价值的高低。这种评价标准的缺陷为一些不法商贩提供了可乘之机，致使饲料原料、乳制品中掺假行为时有发生。王俊峰于2