《多聚酶链式反应扩增DNA片段》.ppt

多聚酶链式反应扩增DNA片断一、基础知识脱氧核苷酸结构式一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第三位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二脂键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二脂键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二脂键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端O5、DNA分子的空间结构（双螺旋结构）（二）DNA的复制5、原料DNA聚合酶②引物的合成9、精确复制的原因（三）PCR(多聚酶链式反应）3、PCR的条件（四）PCR的反应过程靶序列②复性（退火）靶序列③延伸靶序列靶序列5/5/3/循环次数4、PCR循环的结果五、小结考点一DNA的复制2.DNA的复制需要引物，主要原因是()A．可加快DNA复制速度B．引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合C．引物的5′端有助于DNA聚合酶的延伸DNA链D．DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链3.引物的作用是()A．打开DNA双链B．催化合成DNA子链C．使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始复制D．提供模板考点二PCR技术5、标准的PCR技术过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是（）A.92℃、50℃、72℃B.72℃、50℃、92℃C.50℃、92℃、72℃D.80℃、50℃、72℃引物Ⅰ考点三DNA的复制与PCR比较8、PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。据图回答相关问题：5′-G-G……T-C-3′5′-G-G-OH(引物Ⅰ)3′-C-C……A-G-5′＿＿＿＿＿（引物Ⅱ）95℃↓5′-G-G……T-C-3′3′-C-C……A-G-5′55℃↓5′-G-G-OH5′-G-G……T-C-3′3′-C-C……A-G-5′72℃↓＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿（1）在相应的横线上写出引物Ⅱ，并在复性这一步骤中将引物Ⅱ指置于合适的位置。（2）在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子。（3）若将作为原料的四种脱氧核苷酸用32P标记，请分析循环一次后生成的DNA分子的特点：＿＿＿＿＿（4）PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。例如它不仅可以用于基因的分离、克隆和＿＿＿序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，___________的诊断，肿瘤机制的探索，__________鉴定等诸多方面。作业：