一种URAT1人源化小鼠模型的构建方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114214361A(43)申请公布日2022.03.22(21)申请号202210020025.2C12N9/22(2006.01)(22)申请日2022.01.07A01K67/027(2006.01)A61K49/00(2006.01)(71)申请人中国农业科学院兰州兽医研究所地址730046甘肃省兰州市城关区徐家坪1号申请人中国中医科学院中药研究所(72)发明人陈阿鹏德格晶(74)专利代理机构北京乾成律信知识产权代理有限公司11927代理人姚志远张梅珍(51)Int.Cl.C12N15/85(2006.01)C12N15/89(2006.01)C12N15/90(2006.01)C12N15/113(2010.01)权利要求书2页说明书14页序列表3页附图5页(54)发明名称一种URAT1人源化小鼠模型的构建方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种URAT1人源化动物模型的构建方法，该方法包括以下步骤：(1)将背景动物细胞上的URAT1基因替换成人源URAT1基因；以及(2)使该人源URAT1基因在该背景动物细胞中表达并产生人源化URAT1蛋白，同时降低或消除该背景动物细胞内的内源URAT1基因的表达，从而获得该URAT1人源化动物模型。该方法所构建的尿酸特异性转运体URAT1人源化小鼠模型，具有人类的功能性基因，能够用于URAT1靶向药物筛选，或URAT1靶向药物及与其他药物联用的疗效评价，以及药物后续药理及毒理研究。CN114214361ACN114214361A权利要求书1/2页1.一种URAT1人源化动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将背景动物细胞上的URAT1基因替换成人源URAT1基因；以及(2)使所述人源URAT1基因在所述背景动物细胞中表达并产生人源化URAT1蛋白，同时降低或消除所述背景动物细胞内的内源URAT1基因的表达，从而获得所述URAT1人源化动物模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述人源URAT1基因编码的氨基酸序列选自：a)所述氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；b)所述氨基酸序列与SEQIDNO：1所示氨基酸的序列同一性程度为至少大约为95％、96％、97％、98％或至少99％；c)由核酸序列编码的氨基酸序列，所述核酸序列在严格条件下，与编码SEQIDNO：1所示的氨基酸的核苷酸序列杂交；d)所述氨基酸序列与SEQIDNO：1所示的氨基酸的序列差异不超过5、4、3、2或不超过1个氨基酸；和/或e)所述氨基酸序列具有SEQIDNO：1所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述人源URAT1基因的基因序列选自：a)所述基因编码权利要求2中的氨基酸序列；b)所述基因的CDS编码序列如SEQIDNO：2所示；c)在严格条件下，与SEQIDNO：2所示的核苷酸杂交的基因序列；d)与SEQIDNO：2所示的核苷酸具有至少大约95％、96％、97％、98％或至少99％同一性程度的基因序列；e)编码氨基酸的基因序列，所述氨基酸与SEQIDNO：1所示的氨基酸的同一性程度为至少大约95％、96％、97％、98％或至少99％；f)编码氨基酸的基因序列，所述氨基酸的序列与SEQIDNO：1的差异不超过5、4、3、2或1个氨基酸残基；和/或g)编码氨基酸的基因序列，所述氨基酸具有SEQIDNO：1所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，降低或消除所述背景动物细胞内的内源URAT1基因的表达是通过替换所述背景动物细胞内的内源URAT1基因的外显子1的中间序列而实现的；优选地，所述背景动物为啮齿类动物；更优选地，所述啮齿类动物为小鼠、大鼠或仓鼠；又优选地，所述啮齿类动物为C57BL品系小鼠；特别优选地，所述小鼠为C57BL/6小鼠；尤其优选地，所述细胞为受精卵细胞。5.根据权利要求1至4中任一项所述的构建方法，其特征在于，使用基因编辑技术进行2CN114214361A权利要求书2/2页所述URAT1人源化动物模型的建立；优选地，所述基因编辑技术为基因同源重组技术、CRISPR/Cas9技术、锌指核酸酶技术、转录激活子样效应因子核酸酶技术和/或归巢核酸内切酶技术；更优选地，使用CRISPR/Cas9技术进行所述URAT1人源化动物模型的建立。6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述CRISPR/Cas9技术包括以下步骤：(1)提供包括人源URAT1基因打靶载体、sgRNA表达载体以及Cas9的混合物，其中所述Cas9包括Cas9mRNA和/或Cas