双模态试纸条、制备及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114778830A(43)申请公布日2022.07.22(21)申请号202210474652.3(22)申请日2022.04.29(71)申请人中国农业科学院油料作物研究所地址430062湖北省武汉市武昌区徐东二路2号(72)发明人李培武梁美娟唐晓倩张奇(74)专利代理机构湖北武汉永嘉专利代理有限公司42102专利代理师胡建平(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/532(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图1页(54)发明名称双模态试纸条、制备及其应用(57)摘要本发明提供一种双模态试纸条、制备及其应用。本发明提供了一种双模态免疫试纸条的制备方法，及应用上述试纸条检测样品中黄曲霉毒素产毒真菌的高灵敏检测方法。本发明具有操作简单、灵敏度高、准确度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制的优点，能够实现对样品中的黄曲霉毒素产毒真菌的快速检测。CN114778830ACN114778830A权利要求书1/2页1.一种双模态试纸条，其特征在于：它包括层析试纸条和可结合待测物的聚多巴胺‑铜复合纳米材料标记的多克隆抗体反应试剂，其中：所述的层析试纸条包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述检测线上包被有识别待测物的纳米抗体或单克隆抗体，所述质控线上包被有可与前述聚多巴胺‑铜纳米材料标记的多克隆抗体结合的多克隆抗体。2.根据权力要求1所述的双模态试纸条，其特征在于：所述吸水垫长40～45mm，宽3～5mm；检测垫长25～30mm，宽3～5mm；样品垫长12～18mm，宽2～4mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm；所述检测垫上的检测线与样品垫上沿的间距为5‑8mm，质控线和检测线的间距为5‑12mm。3.根据权力要求1所述的双模态试纸条，其特征在于：所述层析试纸条中检测垫上每厘米检测线所需的纳米抗体或单克隆的包被量为150～900ng；每厘米质控线所需的羊抗兔多克隆抗体的包被量为150～600ng。4.根据权利要求1所述的双模态试纸条，其特征在于：所述的待测物为黄曲霉毒素产毒真菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单核球增多性李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌中的一种或几种；所述的检测线上识别待测物的抗体为纳米抗体或单克隆抗体，与纳米抗体或单克隆抗体相结合的抗体为兔源或鼠源多克隆抗体；所述的质控线上可与多克隆抗体结合的抗体为羊抗兔或羊抗鼠多克隆抗体。5.根据权利要求1所述的双模态试纸条，其特征在于：所述的可结合待测物的聚多巴胺‑铜复合纳米材料标记的多克隆抗体由聚多巴胺‑铜纳米材料与可识别待测物的多克隆抗体经过物理吸附后封闭制得，制备方法：将多巴胺‑铜纳米分散液和可识别检测物的多克隆抗体溶液混合振摇，使聚多巴胺‑铜复合材料和可识别待测物的多克隆抗体充分结合，后封闭多余活性位点，离心后得到聚多巴胺‑铜纳米材料标记的多克隆抗体。6.根据权力要求5中所述的双模态试纸条、制备及其应用，其特征在于：所述聚多巴胺‑铜纳米分散液的浓度为1.0‑3.0mg/mL；所述可识别待测物的的多克隆抗体浓度为10‑1000μg/mL；多巴胺‑铜复合纳米材料分散液与多克隆抗体溶液的质量比为1.5‑50：1；所述的振摇时间为1‑4h；所述封闭液为牛血清白蛋白水溶液，质量百分比为0.5‑5.0％。7.根据权力要求6中所述的双模态试纸条，其特征在于：所述聚多巴胺‑铜纳米分散液采用一步法制得，制备方法为：一定量盐酸多巴胺溶于三羟甲基氨基甲烷缓冲液与乙醇的混合溶液中，20‑35℃搅拌反应0.5‑3h；逐滴加入硫酸铜水溶液，20‑35℃搅拌反应2‑6h，反应结束后，后处理得到聚多巴胺‑铜纳米颗粒。8.根据权力要求7中所述的双模态试纸条，其特征在于：所述盐酸多巴胺溶液的浓度为0.5‑1.5mg/mL；所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的浓度10mM，pH8.5，三羟甲基氨基甲烷缓冲液与乙醇的体积比为3‑5:1；所述硫酸铜水溶液浓度为10‑50mg/mL，所述硫酸铜与盐酸多巴胺的摩尔比为0.7‑9.5：1。9.权利要求1所述的双模态试纸条的制备方法，其特征在于：步骤如下：(1)将吸水纸剪裁得吸水垫；(2)检测垫的制备1)检测线的包被2CN114778830A权利要求书2/2页将识别待测物的纳米抗体或单克隆抗体制成包被液，可选用0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)配制成浓度为0.25～1.5mg/mL的包被液；于样品垫上沿5～8mm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上得到检测线，每厘米检测