与西兰花中2-羟基-3-丁烯基芥子油苷含量相关的SNP标记及引物和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114836559A(43)申请公布日2022.08.02(21)申请号202210313375.8(22)申请日2022.03.28(71)申请人浙江省农业科学院地址310021浙江省杭州市石桥路198号(72)发明人沈钰森王建升顾宏辉虞慧芳盛小光赵振卿(74)专利代理机构成都知棋知识产权代理事务所(普通合伙)51325专利代理师马超前(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表2页附图2页(54)发明名称与西兰花中2-羟基-3-丁烯基芥子油苷含量相关的SNP标记及引物和应用(57)摘要本发明公开了一种与西兰花中2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量相关的SNP标记及引物和应用，该SNP标记位于拟南芥GSL‑OH基因在西兰花中的同源基因BolC3t13531H的第3个外显子中，在西兰花HDEM参考基因组C3染色体第5096634位置的碱基G或C，当碱基序列由G突变为C时，对应合成的氨基酸由甘氨酸变为精氨酸，使得2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量显著提高。本发明针对西兰花GSL‑OH位点开发KASP分子标记，通过关联分析，获得了与2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷紧密连锁的KASP标记，并将该标记成功应用于西兰花芥子油苷育种中。CN114836559ACN114836559A权利要求书1/1页1.与西兰花中2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量相关的SNP标记，其特征在于，该SNP标记位于西兰花基因BolC3t13531H的第3个外显子中，其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示，其具有G/C多态性。2.与西兰花中2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量相关的SNP标记引物，其特征在于，该SNP标记引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1‑3所示。3.根据权利要求2所述的SNP标记引物，其特征在于，核苷酸序列如SEQIDNO.1‑2所示的引物的5'端分别增加通用接头序列。4.根据权利要求3所述的SNP标记引物，其特征在于，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的引物的5'端增加核苷酸序列如SEQIDNO.4所示的通用接头序列；核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的引物的5'端增加核苷酸序列如SEQIDNO.5所示的通用接头序列。5.如权利要求2‑4中任意一项所述的SNP标记引物的应用，其特征在于，该应用选自以下任意一种：(1)在西兰花分子标记辅助育种方面的应用；(2)在西兰花改良育种中的应用；(3)在西兰花中2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量性状鉴定中的应用；(4)在研究西兰花中2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量方面的应用。6.一种筛选高2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量西兰花的方法，其特征在于，该方法包含：采用如权利要求2‑4中任意一项所述的SNP标记引物对待检测西兰花通过KASP技术进行基因分型：基因分型为GG的西兰花的2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量<基因分型为CG的西兰花的2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量<基因分型为CC的西兰花的2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述KASP技术，以待检测西兰花的基因组DNA为DNA模板，与如权利要求2‑4中任意一项所述的SNP标记引物和KASPMastermix进行PCR扩增。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述KASPMastermix包含：FRETcassette荧光引物、ROX内参染料、KlearTaqDNA聚合酶、dNTP和MgCl2。9.含有如权利要求2‑4中任意一项所述的SNP标记引物的KASP分型检测试剂盒。2CN114836559A说明书1/5页与西兰花中2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量相关的SNP标记及引物和应用技术领域[0001]本发明涉及一种SNP标记，具体涉及一种与西兰花中2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷含量相关的SNP标记及引物和应用。背景技术[0002]西兰花(BrassicaoleraceaL.var.italica)中一些芥子油苷降解产生的异硫代腈酸盐具有人体有益的生物活性，特别是萝卜硫苷降解产生的异硫代腈酸盐即萝卜硫素，它不仅可以降低多种癌症的发生，如结肠癌、胰腺癌、膀胱癌等，还可以降低心血管疾病的发生。[0003]十字花科植物中芥子油苷的组成主要受到基因型决定。芥菜、白菜、甘蓝、榨菜、萝卜和油菜中主要以烯基化的2‑丙烯基芥子油苷、3‑丁烯基芥子油苷和2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷为主，与萝卜硫素相比，这些修饰后的芥子油苷代谢产生的异硫代腈酸盐抗癌活性有限。特别是2‑羟基‑3‑丁烯基芥子油苷水解产物唑烷‑2‑硫酮对人体和一些哺乳动物有害，主要是引起甲状腺肿大，因此在油菜育