与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记及引物和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114836561A(43)申请公布日2022.08.02(21)申请号202210313395.5(22)申请日2022.03.28(71)申请人浙江省农业科学院地址310021浙江省杭州市石桥路198号(72)发明人王建升沈钰森顾宏辉虞慧芳盛小光赵振卿(74)专利代理机构成都知棋知识产权代理事务所(普通合伙)51325专利代理师马超前(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/6858(2018.01)权利要求书1页说明书6页序列表2页附图3页(54)发明名称与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记及引物和应用(57)摘要本发明公开了一种与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记及引物和应用，该SNP标记位为GSL090标记和GSL104标记；其中，GSL090的标记位于西兰花MYB28基因BolC7t45028H的第3个外显子中，在西兰花HDEM参考基因组C7染色体第48138625位置的碱基C变成G，对应编码的氨基酸由组氨酸变成天冬氨酸，使得萝卜硫苷的含量显著增加；编号为GSL104的标记位于西兰花MYB28基因BolC9t53733H的第3个外显子中，在西兰花HDEM参考基因组C9染色体第4986869位置的碱基A变成G，对应编码的氨基酸由天冬氨酸变成甘氨酸，使得萝卜硫苷的含量显著增加。CN114836561ACN114836561A权利要求书1/1页1.与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记，其特征在于，该SNP标记位为GSL090标记和GSL104标记；其中，GSL090标记位于西兰花MYB28基因BolC7t45028H的第3个外显子中，其核苷酸序列为SEQIDNO.9，具有C/G多态性；GSL104标记位于西兰花MYB28基因BolC9t53733H的第3个外显子中，其核苷酸序列为SEQIDNO.10，具有A/G多态性。2.与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记引物，其特征在于，SNP标记位为GSL090标记和GSL104标记；其中GSL090标记的引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1‑3所示，GSL104标记的引物的核苷酸序列如SEQIDNO.4‑6所示。3.根据权利要求2所述的SNP标记引物，其特征在于，核苷酸序列如SEQIDNO.1‑2和SEQIDNO.4‑5所示的引物的5'端分别增加通用接头序列。4.根据权利要求3所述的SNP标记引物，其特征在于，核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.4所示的引物的5'端增加核苷酸序列如SEQIDNO.7所示的通用接头序列；核苷酸序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.5所示的引物的5'端增加核苷酸序列如SEQIDNO.8所示的通用接头序列。5.如权利要求2‑4中任意一项所述的SNP标记引物的应用，其特征在于，该应用选自以下任意一种：(1)在西兰花分子标记辅助育种方面的应用；(2)在西兰花改良育种中的应用；(3)在西兰花中萝卜硫苷含量性状鉴定中的应用；(4)在研究西兰花中萝卜硫苷含量方面的应用。6.一种筛选高萝卜硫苷含量西兰花的方法，其特征在于，该方法包含：采用如权利要求2‑4中任意一项所述的SNP标记引物对待检测西兰花通过KASP技术进行基因分型，筛选GSL090标记的基因型为CG且GSL104标记的基因型为AG的西兰花为高萝卜硫苷含量西兰花。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述KASP技术，以待检测西兰花的基因组DNA为DNA模板，与如权利要求2‑4中任意一项所述的SNP标记引物和KASPMastermix进行PCR扩增。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述KASPMastermix包含：FRETcassette荧光引物、ROX内参染料、KlearTaqDNA聚合酶、dNTP和MgCl2。9.含有如权利要求2‑4中任意一项所述的SNP标记引物的KASP分型检测试剂盒。2CN114836561A说明书1/6页与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记及引物和应用技术领域[0001]本发明涉及一种SNP标记，具体涉及一种与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记及引物和应用。背景技术[0002]西兰花中一些芥子油苷降解产生的异硫代腈酸盐具有人体有益的生物活性，特别是萝卜硫苷降解产生的异硫代腈酸盐即萝卜硫素，它不仅可以降低多种癌症的发生，如结肠癌、胰腺癌、膀胱癌等，还可以降低心血管疾病的发生。截至2020年初，美国临床试验官方网站Clinicaltrialsgov已有大量涉及萝卜硫苷或萝卜硫素的临床试验。[0003]十字花科植物中芥子油苷的含量受基因型和环境共同决定。MYB28是十字花科植物中调控脂肪族芥子油苷生物合成的关键转