扑草净半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114853687A(43)申请公布日2022.08.05(21)申请号202210637177.7C07K16/44(2006.01)(22)申请日2022.06.07G01N33/53(2006.01)G01N33/577(2006.01)(71)申请人中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所地址100081北京市海淀区中关村南大街12号(72)发明人金茂俊许灵媛王静曹振金芬佘永新郑鹭飞邵华王珊珊王淼(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师张梦泽(51)Int.Cl.C07D251/52(2006.01)C07K14/77(2006.01)C12N5/20(2006.01)权利要求书1页说明书14页附图5页(54)发明名称扑草净半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种扑草净半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用，属于扑草净免疫分析技术领域。本发明提供的扑草净半抗原纯度高，溶解性和稳定性好，与载体蛋白偶联得到的扑草净完全抗原具有抗原性。采用所述扑草净完全抗原免疫宿主动物得到的抗血清或抗体，能够特异性识别扑草净。本发明制备的扑草净完全抗原免疫宿主动物后，能够刺激宿主动物机体产生高灵敏度和特异性好的扑草净抗体。使用本发明提供的扑草净半抗原、完全抗原、抗体及制备方法，可为扑草净的免疫应用提供技术基础，所制备的抗体可用于建立扑草净免疫学检测方法，具有广阔的应用前景。CN114853687ACN114853687A权利要求书1/1页1.一种结构式如式I所示的扑草净半抗原，所述式I中R1为连接基团，R1能够与载体蛋白偶联；2.根据权利要求1所述的扑草净半抗原，其特征在于，所述R1为‑(CH2)n‑COOH、‑(CH2)n‑NH2、‑(CH2)n‑OH、‑(CH2)n‑COOR2、‑(CH2)n‑(C6H4)m‑(CH2)n‑COOH、‑(CH2)n‑(C6H4)m‑(CH2)n‑NH2、‑(CH2)n‑(C6H4)m‑(CH2)n‑OH或‑(CH2)n‑(C6H4)m‑(CH2)n‑COOR2，n为0～8，m为0、1或2。3.根据权利要求2所述的扑草净半抗原，其特征在于，所述半抗原的结构如式Ⅱ所示，4.权利要求1～3任意一项所述的扑草净半抗原的制备方法，包括以下步骤：根据扑草净半抗原的结构，在扑草净上引入R1，得到扑草净半抗原；所述R1为能够与载体蛋白偶联的连接基团。5.一种扑草净完全抗原，由权利要求1～3任意一项所述扑草净半抗原与载体蛋白偶联得到。6.根据权利要求5所述的扑草净完全抗原，其特征在于，所述扑草净完全抗原结构式如式III所示；7.一种扑草净单克隆抗体或扑草净纳米抗体，其特征在于，将权利要求5或6所述扑草净完全抗原乳化后免疫宿主动物得到。8.权利要求7所述扑草净单克隆抗体或扑草净纳米抗体的制备方法，包括以下步骤：将扑草净完全抗原乳化后免疫宿主动物，从所述宿主动物中分离脾细胞，在体外将所述脾细胞与SP2/0瘤细胞融合，筛选能够分泌扑草净抗体的单克隆杂交瘤细胞株，基于所述单克隆杂交瘤细胞株制备扑草净单克隆抗体；或者，提取宿主动物血液中的总RNA，反转录为cDNA，通过生物工程技术构建的噬菌体或酵母抗体表达库筛选得到扑草净纳米抗体。9.一种检测扑草净的试剂或试剂盒，含有权利要求7所述扑草净单克隆抗体或扑草净纳米抗体或者权利要求8所述制备方法制备得到的扑草净单克隆抗体或扑草净纳米抗体。10.权利要求7所述扑草净单克隆抗体或扑草净纳米抗体或者权利要求8所述制备方法制备得到的扑草净单克隆抗体或扑草净纳米抗体或者权利要求9所述的试剂或试剂盒在检测扑草净中的应用。2CN114853687A说明书1/14页扑草净半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于扑草净免疫分析技术领域，具体涉及扑草净半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用。背景技术[0002]扑草净英文名称为prometryn，化学名称为2‑甲硫基‑4,6‑二(异丙胺基)‑1,3,5‑三氮苯，又称扑蔓净，割草佳，CAS登记号为7287‑19‑6，分子式为C10H19N5S，相对分子量为241.36，化学结构如下所示：[0003][0004]扑草净通过抑制光合电子传递或拦截传递到氧化型辅酶Ⅱ(NADP+)的电子，可以抑制植物的光合作用，进而达到除草的目的。这类农药结构稳定，在中性的条件下不会发生水解、降解、生物光解。不合理的扑草净施药方式与施药剂量会造成环境污染与农药残留问题，残留的扑草净可以通过富集作用在食物链中不断传递、迁移，从而对农产品的质量与安全、生态环境造成不良的影响，进而危害人类健康。因此，需对扑草净的残留水平进行监测。[0005]目前已经建