甲基异柳磷半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115925740A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202310023785.3G01N33/53(2006.01)(22)申请日2023.01.09C07K1/107(2006.01)(71)申请人中国中医科学院医学实验中心地址100010北京市东城区东直门内南小街16号(72)发明人吕俊海(74)专利代理机构北京细软智谷知识产权代理有限责任公司11471专利代理师秦琼(51)Int.Cl.C07F9/24(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K16/44(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图1页(54)发明名称甲基异柳磷半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用(57)摘要本发明属于甲基异柳磷检测技术领域，具体涉及一种甲基异柳磷半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用。本发明提供的甲基异柳磷半抗原，以甲基异柳磷和酸酐为主要原料，通过一步反应，在简单的反应条件下，EP管中即可完成，产物经简单萃取即可，制备工艺简单，且产物尽可能的保留了甲基异柳磷分子结构，未在甲基异柳磷主结构上增加或减少基团，有利于提高所得甲基异柳磷半抗原分子在抗原性、以之制备的抗体对甲基异柳磷的特异性以及免疫检测试剂的灵敏度和特异性。CN115925740ACN115925740A权利要求书1/2页1.一种甲基异柳磷半抗原，其特征在于，其具有式Ⅰ所示的结构：式Ⅰ；其中，m为1‑3的整数。2.权利要求1所述的甲基异柳磷半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将甲基异柳磷和二酸酐混合于溶剂中使反应，完成后得到混合反应液；（2）将所述混合反应液干燥，以超纯水萃取，得到第一水相；（3）将所述第一水相以二氯甲烷萃取，得到第二水相，再进行干燥，得到甲基异柳磷半抗原。3.根据权利要求2所述的甲基异柳磷半抗原的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的二酸酐选自丁二酸酐、戊二酸酐或己二酸酐；和/或，所述的溶剂为吡啶；和/或，所述的甲基异柳磷和二酸酐的摩尔比为1:1；和/或，还包括催化剂，所述的催化剂为4‑二甲氨基吡啶或4‑吡咯烷基吡啶；和/或，所述反应的温度为4~80℃；和/或，步骤（2）中，将所述混合反应液采用氮气吹干，再以等体积4℃预冷的超纯水萃取，得到第一水相；和/或，步骤（3）中，将所述第一水相以等体积二氯甲烷萃取，得到第二水相，再采用氮气吹干，得到甲基异柳磷半抗原。4.根据权利要求3所述甲基异柳磷半抗原的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述反应的温度为56℃，反应的时间为5h。5.一种甲基异柳磷完全抗原，其特征在于，其是权利要求1所述的甲基异柳磷半抗原与载体蛋白的偶联物。6.根据权利要求7所述的甲基异柳磷完全抗原，其特征在于，所述的载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白。7.权利要求5或6所述的甲基异柳磷完全抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）取一定量甲基异柳磷半抗原溶于有机溶剂中，边搅拌边加入等摩尔的偶联剂，避光活化10‑16h，再离心，取上清，得到活性酯；（2）将载体蛋白溶于pH=9.0的碳酸盐缓冲液中，搅拌下将步骤（1）得到的活性酯滴入载体蛋白溶液，滴完继续搅拌5‑10h；（3）将步骤（2）所得液体离心取上清，用超纯水透析，再经冻干即得。8.根据权利要求7所述的甲基异柳磷完全抗原的制备方法，其特征在于，所述的偶联剂为二环己基碳二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺；和/或，所述的溶剂为N,N‑二甲基甲酰胺；和/或，所述的活性酯和载体蛋白的摩尔比为50‑150:1。9.一种甲基异柳磷抗体，其特征在于，其是由权利要求7或8所述的甲基异柳磷完全抗2CN115925740A权利要求书2/2页原经动物免疫得到。10.权利要求9所述的甲基异柳磷抗体在用于免疫检测甲基异柳磷残留中的应用。3CN115925740A说明书1/5页甲基异柳磷半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于甲基异柳磷检测技术领域，具体涉及一种甲基异柳磷半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用。背景技术[0002]我国是农药生产和使用大国，农药的使用给农业创造了经济效益，同时农药残留也造成了环境污染和食品安全等诸多问题。不仅是农业，中药材产业方面也存在同样问题。随着我国经济的高速发展，人们对健康的日益重视推动着中药资源的需求量日益增加；越来越多的人工种植中药材成为中药材的主力军。但因为一些原因，农药残留污染问题在当前中药材生产中较为突出，并且中药农药残留问题已在很大程度上影响了我国中药的出口。因此国家加强了对中药农药残留的检测要求；2020版《中国药典》中要求33种农残必检，这其中