一种岩藻多糖酶基因Fcn1及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114854778A(43)申请公布日2022.08.05(21)申请号202210396431.9C12N1/21(2006.01)(22)申请日2022.04.15C12P19/02(2006.01)C12P19/14(2006.01)(71)申请人青岛农业大学C12R1/19(2006.01)地址266000山东省青岛市城阳区长城路700号(72)发明人陈铁军王莹王立平朱昱兴秦敏战旭宁(74)专利代理机构青岛合创知识产权代理事务所(普通合伙)37264专利代理师王晓晓(51)Int.Cl.C12N15/56(2006.01)C12N9/24(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12N15/70(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表3页附图4页(54)发明名称一种岩藻多糖酶基因Fcn1及其应用(57)摘要本发明公开了一种岩藻多糖酶基因Fcn1及其应用。所述Fcn1基因的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，其来源于菌株FlavobacteriaceaebacteriumRC2‑3。所述岩藻多糖酶基因Fcn1编码的岩藻多糖酶的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，其具有降解岩藻聚糖硫酸酯的能力。本发明还提供了用于检测所述岩藻多糖酶基因Fcn1的引物的序列。所述Fcn1基因不仅丰富了岩藻多糖酶基因家族，为进一步阐明岩藻多糖酶催化作用机制奠定了基础，有助于推动岩藻多糖资源的开发利用，具有重要的理论价值和生产指导意义。CN114854778ACN114854778A权利要求书1/1页1.一种岩藻多糖酶基因Fcn1，其特征在于，所述Fcn1基因的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。2.根据权利要求1所述的岩藻多糖酶基因Fcn1，其特征在于，所述Fcn1基因来源于FlavobacteriaceaebacteriumRC2‑3菌株。3.用于检测权利要求1所述的岩藻多糖酶基因Fcn1的引物，其特征在于，所述引物的序列为：Fcn1‑F：5’‑GGTACCATGAATAAACTAATTTCAATATTTCTAGGAGGG‑3’；Fcn1‑R：5’‑GGATCCTTAATCTAACCAAGTAATTTTAGCTTC‑3’。4.权利要求1所述的岩藻多糖酶基因Fcn1编码的岩藻多糖酶，其特征在于，所述岩藻多糖酶的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。5.含有权利要求1所述的岩藻多糖酶基因Fcn1的重组载体。6.根据权利要求5所述的重组载体，其特征在于，所述载体为pLB载体。7.含有权利要求1所述的岩藻多糖酶基因Fcn1的重组菌株。8.根据权利要求7所述的工程菌株，其特征在于，所述重组菌株为大肠杆菌。9.权利要求1所述的岩藻多糖酶基因Fcn1或者权利要求3所述的岩藻多糖酶在用于制备降解岩藻聚糖硫酸酯的制剂中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述岩藻多糖酶基因Fcn1编码的岩藻多糖酶通过降解岩藻聚糖硫酸酯中的α1‑3糖苷键来达到降解岩藻聚糖硫酸酯的作用。2CN114854778A说明书1/9页一种岩藻多糖酶基因Fcn1及其应用技术领域[0001]本发明属于基因领域，具体涉及一种岩藻多糖酶基因Fcn1及其应用。背景技术[0002]岩藻多糖是海洋环境中特有的一类多糖，是一类由单糖组成，化学结构都十分复杂的海洋硫酸多糖(10000‑100000Da)，主要来源于褐藻和一些海洋无脊椎动物，具有抗凝血、抗肿瘤、抗血栓、抗病毒、抗氧化等多种生物学功能。然而，岩藻多糖分子结构的复杂性和多样性导致生物功能与其分子结构之间的关系不明确，严重制约了岩藻多糖在临床医药、保健和食品等领域的应用。与高分子量的岩藻多糖相比，低分子量的岩藻寡糖在生物利用度和生物活性方面显示出一定的优势，具有极大的应用潜力。因此，如何通过降解天然大分子量的岩藻多糖获得具有多种生理功能的低分子量岩藻寡糖引起了国内外科研工作者的关注。[0003]岩藻多糖酶是降解岩藻多糖的关键酶，由于岩藻多糖种类丰富，因此降解岩藻多糖的菌种和其产生的岩藻多糖酶也各有不同。已报道的在CAZY数据库分类的岩藻多糖酶共有18种，岩藻多糖分子结构的复杂性和多样性决定了岩藻多糖酶种类和功能的多样性。目前报道的产岩藻多糖酶菌株存在产酶量低和产出酶的酶活力差的问题，面对上述问题，目前的解决方法主要是，通过优化培养基、培养条件和物理诱变的方式来提升产酶量或者酶活力，但效果并不显著，现在依旧无法实现岩藻多糖酶的商品化，目前关于岩藻多糖酶的研究主要集中在异源表达和最基本的酶学特性表征方面对岩藻多糖酶的相关机理和底物特异性分析都没有更深入的研究。发明内容[0004]本发明的目的在于提供一种岩藻多糖酶基因Fcn1及其应用。所述Fcn1基因能够