一种用于检测PRRSV抗原的纳米抗体对、试剂盒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114891095A(43)申请公布日2022.08.12(21)申请号202210382554.7G01N33/68(2006.01)(22)申请日2022.04.13(71)申请人中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)地址150030黑龙江省哈尔滨市香坊区哈平路678号(72)发明人孙明霞安同庆孙悦杨勇博(74)专利代理机构哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司23211专利代理师王志新(51)Int.Cl.C07K16/10(2006.01)C07K19/00(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表5页附图3页(54)发明名称一种用于检测PRRSV抗原的纳米抗体对、试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于检测PRRSV抗原的纳米抗体对、试剂盒及其应用，属于生物技术检测技术领域。为了提供一种特异性检测PRRS病毒的抗体对。本发明提供了一种用于检测PRRSV抗原的Nb12抗体和N35抗体，Nb12抗体的可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:7‑9，N35抗体可变区序列如SEQIDNO:10‑12。抗体对能特异性识别PRRSV3抗原，最低检测1.0×10TCID50/100μL病毒。CN114891095ACN114891095A权利要求书1/1页1.一种用于检测PRRSV抗原的纳米抗体对，其特征在于，所述抗体对为Nb12纳米抗体和N35纳米抗体，所述Nb12纳米抗体的可变区的CDR‑1的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示，所述Nb12纳米抗体的可变区的CDR‑2的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示，所述Nb12纳米抗体的可变区的CDR‑3的氨基酸序列如SEQIDNO.9所示；所述N35纳米抗体的可变区的CD‑1的氨基酸序列如SEQIDNO.10所示，所述N35纳米抗体的可变区的CDR‑2的氨基酸序列如SEQIDNO.11所示，所述N35纳米抗体的可变区的CDR‑3的氨基酸序列如SEQIDNO.12所示。2.根据权利要求1所述的纳米抗体对，其特征在于，所述Nb12纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.15所示。3.根据权利要求1所述的纳米抗体对，其特征在于，所述N35纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.16所示。4.根据权利要求1所述的纳米抗体对，其特征在于，所述Nb12纳米抗体的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示。5.根据权利要求1所述的纳米抗体对，其特征在于，所述N35纳米抗体的核苷酸如SEQIDNO.14所示。6.根据权利要求1所述的纳米抗体对，其特征在于，Nb12纳米抗体与辣根过氧化物酶组成融合蛋白。7.权利要求1‑6任一项所述的纳米抗体对在制备用于检测PRRSV抗原的试剂盒的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂盒的检测方法包括酶联免疫法、化学发光检测法、蛋白质印迹检测法或者免疫组化法。2CN114891095A说明书1/7页一种用于检测PRRSV抗原的纳米抗体对、试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明属于生物技术检测技术领域，具体涉及一种用于检测PRRSV抗原的纳米抗体对、试剂盒及其应用。背景技术[0002]猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由PRRS病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)引起的病毒性传染病，该病在临床上主要引起母猪流产以及各年龄段猪的呼吸系统疾病，给养猪业造成不可挽回的经济损失。[0003]目前，PRRSV主要通过q‑PCR检测猪血液病毒感染情况及通过ELISA试剂盒检测抗体水平来判断猪是否感染病毒。q‑PCR方法需要离心机及荧光定量PCR仪提取病毒RNA并进行扩增，需要专业人员进行操作；该方法还存在因引物、反应体系或敏感性问题，导致漏检或假阳性结果。但是，关于纳米抗体在PRRSV病毒抗原诊断方法中的应用未见相关研究报道，也未有商品化产品。因此，筛选与病毒保守的N蛋白反应的纳米抗体，并应用纳米抗体和HRP偶联纳米抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法，无需抗体标记和使用二抗，简化了生产工艺并降低了生产成本，广谱性、高灵敏度高、特异性检测血液及组织液病毒，具有非常广阔的应用前景。发明内容[0004]本发明的目的是为了提供一种特异性检测PRRS病毒的纳米抗体对。[0005]本发明提供了一种用于检测PRRSV抗原的纳米抗体对所述抗体对为Nb12纳米抗体和N35纳米抗体，所述Nb12纳米抗体的可变区的CDR‑1的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示，所述Nb12纳米抗体的可变区的CDR‑2