一种IBV特异性多肽抗原、抗体、ELISA检测试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108727478A(43)申请公布日2018.11.02(21)申请号201810568218.5(22)申请日2018.06.05(71)申请人扬州大学地址225009江苏省扬州市大学南路88号(72)发明人秦爱建武奇钱琨邵红霞叶建强(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204代理人王艳(51)Int.Cl.C07K14/165(2006.01)C07K7/08(2006.01)C07K16/10(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表3页(54)发明名称一种IBV特异性多肽抗原、抗体、ELISA检测试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种鸡传染性支气管炎病毒(IBV)特异性多肽抗原，所述IBV特异性多肽抗原具有氨基酸序列如SEQIDNO：1~9中的任意一条或几条所示，或者具有经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列。本发明还公开了一种IBV特异性多肽抗原组合物。本发明还公开了一种IBV抗体及其制备方法。本发明还公开了一种ELISA检测试剂盒及其检测方法和应用。该抗原表位具有很好的抗体反应性，可以用来特异性检测抗IBV的抗体，具有应用价值。CN108727478ACN108727478A权利要求书1/1页1.一种IBV特异性多肽抗原，其特征在于，所述IBV特异性多肽抗原具有氨基酸序列如SEQIDNO：1~9中的任意一条或几条所示，或者具有经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的IBV特异性多肽抗原，其特征在于，所述IBV特异性多肽抗原具有氨基酸序列如SEQIDNO：6或SEQIDNO：7所示。3.一种IBV特异性多肽抗原组合物，其特征在于，所述IBV特异性多肽抗原组合物为具有氨基酸序列SEQIDNO：7的IBV特异性多肽抗原分别和任意一条具有氨基酸序列SEQIDNO：1~6的IBV特异性多肽抗原的组合，和/或具有氨基酸序列SEQIDNO：6的IBV特异性多肽抗原分别和任意一条具有氨基酸序列SEQIDNO：1~5的IBV特异性多肽抗原的组合。4.一种IBV抗体，其特征在于，所述IBV抗体特异性的与权利要求1或2所述的IBV特异性多肽抗原结合，和/或与权利要求3所述的IBV特异性多肽抗原组合物结合。5.一种IBV抗体的制备方法，其特征在于，将权利要求1或2所述的IBV特异性多肽抗原，和/或与权利要求3所述的IBV特异性多肽抗原组合物与佐剂混合，免疫小鼠、鸡或其他实验动物，经2-3次免疫后即可产生抗IBV特异性抗体。6.一种IBV抗体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将权利要求1或2所述的多肽抗原或权利要求3所述的IBV特异性多肽抗原组合物包被酶标板，包被后用兔血清封闭；2）待检血清稀释后与包被的多肽抗原或多肽抗原组合物相互作用；3）洗涤多次后，加入HRP标记的兔抗鸡二抗共同孵育；4）再次洗涤多次，加TMB显色液反应；5）最后用2mol/L硫酸或0.1%SDS终止反应，以450nm或650nm波长下读取OD值，检测出个体中IBV抗体水平。7.权利要求1或2所述的IBV特异性多肽抗原或权利要求3或4所述的IBV特异性多肽抗原组合物在制备IBV检测试剂盒方面的应用。8.一种ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述ELISA检测试剂盒包括权利要求1或2所述的IBV特异性多肽抗原或权利要求3所述的IBV特异性多肽抗原组合物。9.根据权利要求7所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述ELISA检测试剂盒包括以下组分：包被权利要求1或2所述的IBV特异性多肽抗原或权利要求3所述的IBV特异性多肽抗原组合物的酶标板、酶标抗体、底物溶液、终止液、洗涤液、阴性对照和阳性对照。10.根据权利要求9所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记兔抗鸡IgG。11.根据权利要求8所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述底物溶液为柠檬酸溶液和Na2HPO4·12H2O混匀，加入四甲基联苯胺得到的溶液。2CN108727478A说明书1/8页一种IBV特异性多肽抗原、抗体、ELISA检测试剂盒及其应用[0001]技术方案[0002]本发明属于生物技术检测技术领域，具体涉及一种IBV特异性多肽抗原、IBV抗体、ELISA检测试剂盒及其应用。背景技术[0003]鸡传染性支气管炎病毒(IBV)为γ冠状病毒，可引起肉用鸡严重的呼吸道和肾脏病变以及蛋鸡的产蛋下降，同时传播迅速，给养禽生产带来巨大的经济损失。由于冠状病毒特殊的转录机制，导致新的变异株和血清型不断产生，使该病的防制变得十分困难。目前用于检测IBV抗体的方法