一种检测表达非洲猪瘟抗原蛋白的嵌合PRRSV的抗体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116003618A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202211454942.8G01N33/569(2006.01)(22)申请日2022.11.21G01N33/58(2006.01)G01N33/68(2006.01)(71)申请人中国农业科学院上海兽医研究所地址201100上海市闵行区紫月路518号(72)发明人高飞童光志李国新童武李丽薇周艳君姜一峰郑浩虞凌雪刘长龙(74)专利代理机构北京市诚辉律师事务所11430专利代理师范盈(51)Int.Cl.C07K16/46(2006.01)C07K16/10(2006.01)C07K16/08(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表（电子公布）附图2页(54)发明名称一种检测表达非洲猪瘟抗原蛋白的嵌合PRRSV的抗体及其应用(57)摘要本发明提供一种有效区分嵌合非洲猪瘟病毒p1217蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒的疫苗株和野生毒株的抗体及其应用，可以区分嵌合疫苗rPRRSV‑p1217、野生型的非洲猪瘟和PRRSV，所述纳米抗体具有较强的抗原特异性，仅与表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p1217蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒rPRRSV‑p1217发生抗原抗体反应，与亲本病毒并没有相应的亲和反应。可以有效的区分疫苗株和野生型，便于对疫苗株进行监控，提高疫苗的安全性和可控性。CN116003618ACN116003618A权利要求书1/1页1.一种可以区分嵌合疫苗rPRRSV‑p1217、野生型的非洲猪瘟和野生型的PRRSV的纳米抗体，其特征在于所述抗体为纳米抗体AP1217‑NANO，所述纳米抗体AP1217‑NANO的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。2.一种非疾病的治疗和诊断方法的，有效的区分嵌合疫苗rPRRSV‑p1217的方法，所述方法为利用权利要求1所述的纳米抗体进行检测。3.一种胶体金试剂条，所述胶体金试剂条包括底板、吸水垫纸、NC膜、金垫、样品层析垫，从底板上从上到下依次粘贴吸水垫纸、NC膜、金垫、样品层析垫，所述NC膜上设置有相互分离的结合垫区、检测区和质控区，所述结合垫区喷涂胶体金标记的权利要求1所述的纳米抗体AP1217‑NANO，所述检测区喷涂针对抗原的混合抗体，所述质控区喷涂有与胶体金标记的权利要求1所述的纳米抗体AP1217‑NANO特异结合的抗体。4.如权利要求3所述的胶体金试剂条的应用，所述应用为非疾病的治疗和诊断的区分rPRRSV‑p1217、亲本猪瘟病毒、PRRSVHuN4‑F112株。2CN116003618A说明书1/6页一种检测表达非洲猪瘟抗原蛋白的嵌合PRRSV的抗体及其应用技术领域[0001]本发明属于生物工程领域，具体地说，涉及一种检测表达非洲猪瘟抗原蛋白的嵌合PRRSV的抗体及其应用。背景技术[0002]ASFV是感染家猪或者野猪引起的一种急性、烈性、出血性，高度接触性传染病。其特征是病程短、高热和出血性病变，急性感染死亡率高达100％。严重威胁全球养猪业。目前尚没有有效的疫苗和治疗方法。ASF疫情使我国生猪存栏量和出栏量下降20％‑50％，许多猪场因ASF疫情完全覆没，严重削弱了我国猪肉的有效供给，导致我国生猪和猪肉价格均出现翻番。ASF的病原ASFV是非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属的唯一成员，为大型双链DNA病毒，主要在巨噬细胞中复制，其基因组约170‑193kb，含有150‑167个ORF，编码150‑200种蛋白质。ASFV粒子直径约为200nm，呈20面体结构，由多层同心圆结构组成，由内到外依次是类核(Nucleoid)、核壳(Coreshell)、内囊膜(Innerenvelope)、衣壳(Capsid)和外囊膜(Externalenvelope)。[0003]ASFV的p12蛋白是ASFV感染晚期表达的膜蛋白，由O61R基因编码，共186nt，其分子量大小约为6.7kD。其C‑末端区域富含半胱氨酸的结构域，参与病毒的吸附。有学者通过免疫电子显微镜发现，该蛋白位于病毒粒子层，细胞表面的膜蛋白是ASFV的受体。在病毒侵染细胞时，可吸附细胞膜，使病毒进入细胞内。在机体外，p12蛋白的抗体可阻断ASFV侵入宿主细胞。另外，利用HEK293细胞表达p12蛋白，纯化后免疫猪能产生针对p12的特异性抗体，表明p12具有一定的免疫原性。另一方面，ASFV的P17蛋白是ASFV表达的晚期膜蛋白，由D117L基因编码，核苷酸序列共354nt，编码蛋白大小为13.1kD。位于病毒内膜的跨膜蛋白。与早期膜蛋白p1217一样，p17对于病毒活力至关重要，能促进ASFV病毒的二十面体颗粒形成。若缺失p17，组装后的病毒将