一种用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114934123A(43)申请公布日2022.08.23(21)申请号202210723795.3(22)申请日2022.06.23(71)申请人新疆农业大学地址830052新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区南昌路42号(72)发明人刘玲玲刘武军方超曹行马海玉陈斌何海迎(74)专利代理机构西安鼎迈知识产权代理事务所(普通合伙)61263专利代理师刘喜保(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用，通过选用新疆驴CA8基因特定SNP位点作为分子标记物，匹配特异性引物及相适应的扩增体系，制备获得用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，通过检测能够准确筛选获得产奶量、以及驴乳中非脂成分、蛋白质含量相对较高的个体，根据相对应的基因型进行新疆驴优良产奶形状个体的选育，从而加快其育种进程，促进驴产业的进一步发展。CN114934123ACN114934123A权利要求书1/1页1.用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，所述用于检测CA8基因的SNP位点为g.89567442。2.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，CA8基因的SNP位点g.89567442等位基型因包括GG、GT和TT。3.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒通过以下共建体系建成获得：(1)根据新疆驴CA8基因的SNP位点g.89567442，自行人工设计特异性引物；(2)PCR反应试剂：2×KASPMix、上下游引物、DNA模板和水。4.如权利要求2所述用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，所述的特异性引物序列如下所示：上游引物1：5'‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGAAAAGGAGCAATACAATCACACTA‑3'；上游引物2：5'‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAAAAGGAGCAATACAATCACACTC‑3'；下游引物1：5'‑CAACTCTTTTAGCCGATTATTTTATT‑3'。5.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒的应用中，通过检测方法体现，具体包括如下步骤：(1)利用装有枸橼酸钠抗凝剂的采血管，活体采集新疆驴颈静脉血5ml，‑20℃保存；提取基因组DNA，‑20℃保存待用；(2)采用步骤(1)总共提取获得的新疆驴基因组DNA进行，CA8基因PCR扩增，根据设计的引物，利用权利要求1或2任意一项提供的试剂盒特异性扩增CA8基因；PCR反应体系为，2×KASPMix5μL，100μM上游引物10.015μL，100μM上游引物20.015μL，100μM下游引物0.04μL上下游引物各0.07μL，基因组DNA2μL，ddH2O补充至10μL；反应条件为，94℃起始步骤，1个循环10min；94℃10个循环20s；61℃45s；94℃35个循环20s；55℃20s；(3)基于步骤(2)中扩增获得的产物进行KASP分型：基于引物末端碱基的特异匹配来对SNP分型，利用Douglas平台，对SNP进行双等位基因判断，从而进行基因分型。6.如权利要求2或5任意一项所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒在产奶量高的新疆驴的选育中的应用。7.如权利要求2或5任意一项所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒在非脂成分、蛋白质含量相对较高的新疆驴的选育中的应用。2CN114934123A说明书1/6页一种用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用技术领域[0001]发明涉及动物遗传选育的鉴定方法，具体的，本发明涉及一种用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用的技术领域。背景技术[0002]驴奶其实也是一种古老的产品，希罗多德在公元前五世纪饮用它作为一种营养丰富的饮料。公元前2500年前的埃及，也有在浮雕上记载关于驴奶的内容。而在我国，唐朝药王孙思邈在《千金食治》中记载驴奶“主大热，黄疸，止渴”。明代医药学家李时珍在《本草纲目》中也有记载过“驴乳味甘、冷利、无毒、主治小儿热急黄等，多服便利、疗大热、止消渴、小儿热急、惊邪赤热，小儿疾，频热炊之，治气邪、解小儿热毒、不生痘疹”。由此不难看出，驴奶不仅有一定的历史，还有一定的药用价值。[0003]但是，目前未有乳用驴的专门化品种，且生产用母驴的个体乳产量较低，远低于牛奶产量，甚至低于马奶产量，无法满足人们对驴奶的乳制品的需要。新疆驴是一种具有肉、皮、药、乳、役等多种经济用途的畜种。选育具有