用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114990232A(43)申请公布日2022.09.02(21)申请号202210723822.7(22)申请日2022.06.23(71)申请人新疆农业大学地址830052新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区南昌路42号(72)发明人刘玲玲刘武军方超曹行马海玉陈斌何海迎(74)专利代理机构西安鼎迈知识产权代理事务所(普通合伙)61263专利代理师刘喜保(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用，通过选用新疆驴NUMB基因特定SNP位点作为分子标记物，匹配特异性引物及相适应的扩增体系，制备获得用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，通过检测能够准确筛选获得产奶量、以及驴乳中乳脂率、总固体含量和尿素氮相对较高的个体，根据相对应的基因型进行新疆驴优良产奶形状个体的选育，从而加快其育种进程，促进驴产业的进一步发展。CN114990232ACN114990232A权利要求书1/1页1.用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，所述用于检测NUMB基因的SNP位点为g.46709914。2.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，NUMB基因的SNP位点g.46709914等位基型因包括GG、GT和TT。3.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒通过以下共建体系建成获得：(1)根据新疆驴NUMB基因的SNP位点g.46709914，自行人工设计特异性引物；(2)PCR反应试剂：2×KASPMix、上下游引物、DNA模板和水。4.如权利要求2所述用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，所述的特异性引物序列如下所示：上游引物1：5'‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCACCTCAAGGTGTCTAATCCATAG‑3'；上游引物2：5'‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCACCTCAAGGTGTCTAATCCATAT‑3'；下游引物1：5'‑TGAGGAAGTGATATTTGAGTAGAGC‑3'。5.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒的应用中，通过检测方法体现，具体包括如下步骤：(1)利用装有枸橼酸钠抗凝剂的采血管，活体采集新疆驴颈静脉血5ml，‑20℃保存；提取基因组DNA，‑20℃保存待用；(2)采用步骤(1)总共提取获得的新疆驴基因组DNA进行，NUMB基因PCR扩增，根据设计的引物，利用权利要求1或2任意一项提供的试剂盒特异性扩增NUMB基因；PCR反应体系为，2×KASPMix5μL，100μM上游引物10.015μL，100μM上游引物20.015μL，100μM下游引物0.04μL上下游引物各0.07μL，基因组DNA2μL，ddH2O补充至10μL；反应条件为，94℃起始步骤，1个循环10min；94℃10个循环20s；61℃45s；94℃35个循环20s；55℃20s；(3)基于步骤(2)中扩增获得的产物进行KASP分型：基于引物末端碱基的特异匹配来对SNP分型，利用Douglas平台，对SNP进行双等位基因判断，从而进行基因分型。6.如权利要求2或5任意一项所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒在产奶量高的新疆驴的选育中的应用。7.如权利要求2或5任意一项所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒在乳脂率、总固体含量和尿素氮相对较高的新疆驴的选育中的应用。2CN114990232A说明书1/6页用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用技术领域[0001]发明涉及动物遗传选育的鉴定方法，具体的，本发明涉及用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用的技术领域。背景技术[0002]驴奶是一种低脂肪、低胆固醇、高钙、富硒、美容、抗衰老的天然乳品，驴奶中各营养成分的比例最为接近人乳，被称为最接近母乳的乳中珍品，其脂肪含量比牛奶略低，胆固醇的含量仅为牛奶的15％，维生素C的含量高，为牛奶的4.75倍，驴奶中含氨基酸齐全，其中必须氨基酸含量高，占蛋白质总量的46.7％，远高于牛奶42.2％和人乳38.1％的含量，此外，驴奶中微量元素含量充足，钙含量丰富，尤其是硒的含量较高，为牛奶的5.2倍，与我国目前《富硒食品含硒量标准》相比，属于富硒食品，所以驴奶具有强身健体、延年益寿、治疗疾病等众多功效。[0003]但是，目前未有乳用驴的专门化品种，且生产用母驴的个体乳产量较低，远低于牛奶产量，甚至低于驴奶产量，无法满足人们对驴奶的乳制品的