小麦抗条锈病基因Yr69及其连锁的SSR分子标记以及使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105695605A(43)申请公布日2016.06.22(21)申请号201610205236.8(22)申请日2016.04.05(71)申请人山西省农业科学院作物科学研究所地址030031山西省太原市小店区龙城大街81号(72)发明人张晓军畅志坚贾举庆郭慧娟李欣詹海仙乔麟轶阎晓涛任永康张立生李晓华朱艳(74)专利代理机构太原科卫专利事务所(普通合伙)14100代理人朱源(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12N15/29(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表1页附图2页(54)发明名称小麦抗条锈病基因Yr69及其连锁的SSR分子标记以及使用方法(57)摘要本发明涉及植物遗传学和小麦育种领域，特别涉及小麦抗条锈病形状的分子标记，具体为小麦抗条锈病基因Yr69及其连锁的SSR分子标记以及使用方法，解决现有的分子标记与抗条锈病基因Yr69的遗传距离远，标记不够准确的问题，使用方法：1）、以小麦DNA为模板，2SA33为引物扩增；2）、程序为：预变性；变性，退火，延伸，循环；延伸；保存备用；3）、电泳后将产物和上样缓冲液混合后点样，电泳后染色拍照；4）、扩增出的特异条带说明存在Yr69。优点：1、获得2AS33；2、显性标记，遗传距离为1.9cM，快速、准确鉴定Yr69基因并预测白粉病抗性，加快Yr69的利用。CN105695605ACN105695605A权利要求书1/1页1.一种小麦抗条锈病基因Yr69连锁的SSR分子标记，其特征在于：所述SSR分子标记为引物2AS33，所述引物的核苷酸序列为：上游序列为5'-AGAAGGCACACTGCTGGAAC-3'，下游序列为5'-ACATGAGTGAGTTGTGAGTC-3'。2.根据权利要求1所述的小麦抗条锈病基因Yr69连锁的SSR分子标记，其特征在于：所述分子标记与小麦抗条锈病基因Yr69的遗传距离为1.9cM。3.根据权利要求1所述的小麦抗条锈病基因Yr69连锁的SSR分子标记，其特征在于：所述分子标记用于鉴定小麦中是否含有抗条锈病基因Yr69的使用方法包括如下操作步骤：1）、以小麦基因组DNA为PCR扩增模板，以SSR分子标记2AS33为引物，进行PCR扩增，反应体系为20μL，所述反应体系包括：50-100ng/μL小麦基因组DNA，10×PCRbuffer，具体为：10mMTris-HCl，pH值8.3，50mMKCl，1.5mMMgCl2；0.2mMdNTP，1UTaq酶，0.25μM引物，最后加入一滴矿物油；2）、PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，55℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min；4℃保存备用；3）、电泳为8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，将5μLPCR产物和5μL上样缓冲液混合后点样，180V电压下电泳2h，硝酸银染色拍照；4）、分析鉴定，能扩增出269bp的特异条带，则说明小麦种质中存在抗条锈病基因Yr69，否则，待测小麦种质中不存在抗条锈病基因Yr69。4.小麦抗条锈病基因Yr69连锁的SSR分子标记在辅助选择标记抗条锈病基因Yr69中的应用。5.一种小麦抗条锈病基因，其特征在于：所述抗条锈病基因为Yr69，其来源于长穗偃麦草，位于小麦与长穗偃麦草与小麦杂交品种的小麦2AS染色体远离着丝粒的顶端。2CN105695605A说明书1/4页小麦抗条锈病基因Yr69及其连锁的SSR分子标记以及使用方法技术领域[0001]本发明涉及植物遗传学和小麦育种领域，特别涉及小麦抗条锈病性状的分子标记，具体为小麦抗条锈病基因Yr69及其连锁的SSR分子标记以及使用方法。背景技术[0002]由小麦条锈菌（Pucciniastriiformiswestf.sp.tritici(Pst)）引起的小麦条锈病是最主要的世界性真菌病害。它具有流行速度快、发病面积广、危害程度高等特点，病害严重时，可使小麦减产40%以上，甚至绝收。合理利用抗病品种是防治该病害最经济环保、安全有效的方法。但由于小麦条锈病菌的高度变异性及小麦条锈菌新致病类型CYR31、CYR32和CYR33等的出现和流行以及抗病品种的大面积单一种植，致使大多数品种抗性不能持久，很容易被条锈菌新小种所克服。因此，不断寻找、鉴定新的抗性资源，选育新的抗性小麦品种，并与其它抗条锈基因聚合，培育持久抗病性的聚合品种、多系品种和多抗品种，对延缓条锈菌病理小种的毒性变异、拓宽小麦品种遗传基础、增加抗病品种的使用寿命非常必要，这也是实现我国小麦条锈病可持续控制的根本措施。[0003]小麦的近缘种属植物蕴藏着丰富的抗条锈病基因资源。随着小麦